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Home医源资料库在线期刊中华医药杂志2006年第6卷第12期

HPLC-MS法测定人血浆中罗红霉素浓度

来源:中华医药杂志
摘要:【摘要】目的建立液相色谱-质谱测定血浆中罗红霉素浓度的方法。选择性正离子监测(SIM),质荷比(m/z)罗红霉素为838、麦迪霉素为815。结果罗红霉素血药浓度在25~16000ng/ml间线性关系良好,低、中、高三浓度的平均相对回收率分别为98。结论本方法简便、快速、准确、灵敏度高,可用于罗红霉素的治疗药物监测及药动......

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  【摘要】  目的  建立液相色谱-质谱测定血浆中罗红霉素浓度的方法。 方法  色谱柱为Thermo Hypersil-HyPURITY C18(150×2.1nm,  5μm);流动相为10mM乙酸铵(1.5%乙酸,0.1%TFA):甲醇:乙腈(38:365:26);电喷雾电离源(ESI);选择性正离子监测(SIM), 质荷比(m/z)罗红霉素为838、麦迪霉素为815。结果  罗红霉素血药浓度在25~16000ng/ml间线性关系良好,低、中、高三浓度的平均相对回收率分别为98.6%、100.2%和99.4%,日内、间相对RSD均小于15%。结论  本方法简便、快速、准确、灵敏度高,可用于罗红霉素的治疗药物监测及药动学研究。

    【关键词】  罗红霉素;高效液相色谱-质谱法;血药浓度

      罗红霉素(roxithromycin)由红霉素衍生而来,抗菌谱与红霉素相同,但抗菌作用比红霉素强,尤其对流感嗜血杆菌、淋病奈瑟杆菌、大肠杆菌、百日咳杆菌的抗菌作用较强,对肺炎衣原体、肺炎支原体、军团菌等细胞内病原微生物的作用也超过红霉素。其特点为对胃酸稳定、口服吸收好、组织穿透性强、血药峰浓度高、分布广且不良反应较少[1]。有关罗红霉素的血液药物浓度测定方法,文献报道较多的是微生物法[2~4],操作繁杂且系统误差大,影响结果的准确性;也有人用HPLC-UV法检测[5],但罗红霉素紫外吸收波长在220nm以下,血浆中的许多内源性物质对其检测有干扰,检测灵敏度不高。本文拟通过实验建立液相色谱-质谱测定血液中罗红霉素浓度的方法,为罗红霉素的治疗药物监测及药动学研究提供简便、准确、高灵敏度的检测方法。

    1  材料与方法

    1.1  药品与试剂  罗红霉素标准品(购自中国药品生物制品检定所),麦迪霉素标准品(购自中国药品生物制品检定所)。乙腈、甲醇为色谱纯,其余试剂均为分析纯。

    1.2  仪器  岛津 LCMS2010液相色谱-质谱联用仪,LC-10AD VP低压四元梯度泵,CTO-10A VP柱温箱,SCL-10AD VP系统控制器,LCMSsolution工作站。上海精宏实验设备有限公司DZF-6020型真空干燥器,Heraeus Biofuge stratos 高速冷冻离心机。

    1.3  色谱和质谱条件    色谱柱为Thermo Hypersil-HyPURITY C18(150×2.1nm,  5μm);流动相为10mM乙酸铵(1.5%乙酸,0.1%TFA):甲醇:乙腈(38:365:26);流速0.25ml/min;柱温45℃。电喷雾电离源(ESI),选择性正离子监测(SIM), 质荷比(m/z)为838(罗红霉素, M+H),815(麦迪霉素,M+2H)带正电荷的分子离子峰,电离源电压4.5kV,喷雾气氮气的流速为1.5L/min,干燥气体氮气流速为10L/min。脱溶剂温度为250℃, 检测器电压1.5kV。

    1.4  血浆样品处理  吸取0.1ml血浆,置2ml离心管中,加入内标液50μl,0.1ml饱和碳酸钠溶液,漩涡混匀,加提取液(正己烷:二氯甲烷:异丙醇=20:10:1)1ml,漩涡振荡提取3min,14000r/min离心5min。吸取上层有机相于真空干燥器中抽干,残渣用流动相0.1ml溶解,离心,取上清液5μl进样。记录色谱图,内标法以峰面积定量。

    2  实验结果

    2.1  质谱和色谱图  图1中A、B分别为罗红霉素和麦迪霉素的质谱扫描图谱;图2中A、B、C分别空白血样、空白血样中加入标准品、受试者服药后6h血浆的总离子流图,麦迪霉素的保留时间约为 2.5min,罗红霉素的保留时间约为 3.0min。血浆内源性物质及其他杂质不干扰样品的分离测定。

    2.2  线性范围及最小定量浓度  用空白血浆将罗红霉素标准储备液稀释成不同浓度(25、50、125、250、500、1000、2000、4000、8000、16000ng/ml)的标准血样,按“5.2”项下样品处理方法处理。以样品峰面积与内标峰面积之比(Y)对药物浓度(C)进行回归处理,回归方程为Y = 0.0.0009 * Conc.( ng/ml) + 0.017,R2 = 0.9990,线性范围25~16000ng/ml,最小可定量浓度为25ng/ml。

    2.3  回收率及精密度  配制浓度50、1000、8000ng/ml的罗红霉素标准血浆各5份,按上法平行操作,进行测定,得日内相对标准差(RSD)均小于15%(分别为8.9%、8.6%和5.7%),平均相对回收率分别为98.6%、100.2%和99.4%。每天配制浓度50、1000、8000ng/ml 的罗红霉素标准血浆各5份,连续测定3天,得日间相对标准差(RSD)均小于15%(分别为10.2%、10.5%和5.8%)

    2.4  萃取回收率  配制浓度50、1000、8000ng/ml的罗红霉素标准血浆各5份;按5.2项下操作,记录罗红霉素和内标峰面积。另配制含罗红霉素浓度分别50、1000、8000ng/ml,内标浓度为10g/ml的流动相溶液各1ml,直接进样5l,记录罗红霉素和内标峰面积。计算血浆样品和流动相样品的峰面积百分比,得罗红霉素的萃取回收率分别为64.6%、64.2%、64.6%,内标的萃取回收率为62.5%。

    2.5  稳定性考察  血样的室温稳定性:配制浓度50、1000、8000ng/ml的罗红霉素标准血浆,在室温条件下放置,分别在0、2、4、6、12h按上述方法测定罗红霉素的浓度,结果表明RSD<15%, 样品在室温放置12h内稳定。

    血样的冻融稳定性:配制浓度50、1000、8000ng/ml的罗红霉素标准血浆,在-40℃冰箱中冷冻后取出,室温融化,测定罗红霉素的浓度,重复操作4次,结果表明RSD<15%,样品在4次冻融过程中稳定,氨氯地平血样历经3次冻融后稳定。

    血浆样品冷冻放置稳定性:配制浓度50、1000、8000ng/ml的罗红霉素标准血浆,在-40℃冰箱中放置,分别在0、5、10、20、30天取样按上述方法测定罗红霉素的浓度,结果表明RSD<15%,样品在冷冻条件下放置30天内稳定。

    3  讨论

    本试验建立起罗红霉素血药浓度的高效液相色谱-质谱检测法,方法灵敏、准确、重现性好,操作简便,血浆内源杂质无干扰,最低定量浓度达25ng/ml,能够满足罗红霉素生物利用度和药代动力学研究的要求。

    【参考文献】

    1  Zhanel GG,Dueck M,Hoban DJ,et al.Review of macrolides and ketolides:focus on respiratory tract infections .Drugs, 2001,61(4):443-498.

    2  郁继诚,张菁,曹忆堇,等.国产罗红霉素胶囊剂的药代动力学及相对生物利用度测定.中国新药杂志,2001,10(9):685-688.

    3  杜智敏,张波,赵红光,等.国产罗红霉素胶囊的人体生物利用度和药代动力学 .哈尔滨医科大学学报,2000,34(6):425-427.

    4  杨昭毅,魏伟,汪倪萍,等.罗红霉素胶囊人体相对生物利用度研究 . 安徽医科大学学报, 2005,40(3):267-269.

    5  Macek J,Ptacek P.Determination of roxithromycin in human plasma by high- perform ance liquid chromatography with spec-trophotometric detection .J Chromatogr B Biomed Sci App1, 1999,723 (2):233-235.

  作者单位: 414000 湖南岳阳,中国化学工程第四建设公司职工医院

  (编辑:若  木)

作者: 周知 2007-4-26
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