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Home医源资料库在线期刊中华医药杂志2006年第6卷第12期

RP-HPLC法测定状元深海龙酒中丹参酮ⅡA的含量

来源:中华医药杂志
摘要:【摘要】目的建立状元深海龙酒中丹参酮ⅡA的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法测定,用C18柱(4。结果丹参酮ⅡA的线性范围为0。丹参酮ⅡA平均回收率为99。...

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  【摘要】  目的  建立状元深海龙酒中丹参酮ⅡA的含量测定方法。方法  采用反相高效液相色谱法测定,用C18柱(4.0×250mm,5μm),以甲醇-水(70:15)为流动相,检测波长270nm。结果  丹参酮ⅡA的线性范围为0.06~0.18mg/ ml;丹参酮ⅡA平均回收率为99.81%,RSD=1.08%(n=5)。结论  所用方法测定样品灵敏度高,重复性好,能有效地控制状元深海龙酒的质量。

    【关键词】  状元深海龙酒;丹参酮ⅡA;反相高效液相色谱法;含量测定

     状元深海龙酒是由海龙、丹参、羊腰子等22味药组成的复方中药制剂,具有补肾益精功效。用于肾精亏损,腰膝酸软,倦怠无力,健忘失眠,阳痿早泄等证候者。笔者对处方中的丹参进行了含量测定,丹参主要含有丹参酮类成分,而以丹参酮ⅡA含量最高,现代药理研究成果表明,以丹参酮ⅡA为代表的丹参酮类成分具有明显的药理活性,所以在含量测定时首先考虑丹参酮ⅡA,对于它的含量测定方法较多,参考药典[1]中丹参药材的含量测定方法和有关文献[2],最终采用反相高效液相色谱法建立了适合本制剂的含量测定方法,并经过方法学考察及3批样品测定,结果表明该测定方法简便可行、重现性、精密度良好,回收率符合要求,整个试验过程可操作性强,能够客观地控制本品的含量,现将研究情况报告如下。

    1  仪器与试药

    1.1  仪器  Waters 600E液相色谱仪;Waters 600泵,Waters2997光电二极管矩阵检测器;millennium32色谱工作站。FA1004电子分析天平(上海良平仪表有限公司),KQ3200超声清洗器(中国昆山市超声仪器有限公司) 。丹参酮ⅡA(供含量测定用,中国药品生物制品检定所,批号:110821-200406)

    1.2  试剂及试样  甲醇为色谱纯、其余试剂均为分析纯、水为重蒸水、状元深海龙酒(自制)。

    2  含量测定

    2.1  色谱条件与系统适用性  C18柱(4.0×250mm,5μm);流动相:甲醇-水 (70:15);流速:0.8ml/min;检测波长270nm;柱温:室温;进样量:10μl。理论塔板数按丹参酮ⅡA峰计算不低于2000。

    2.2  对照品溶液的制备  精密称取在五氧化二磷干燥器中干燥36h的丹参酮ⅡA对照品适量置于棕色量瓶中,加甲醇制成每1ml含丹参酮ⅡA 8μg的溶液。

    2.3  供试品溶液的制备  精密量本品50ml,水浴蒸至约10ml,加入预先处理过的中性氧化铝约10g,小心搅拌均匀至干,装入中性氧化铝柱(100~200目,1.5cm)中,以无水乙醇进行洗脱,收集洗脱液约150ml,水浴蒸干,放冷,用适量甲醇溶解残渣,转移至5ml棕色量瓶中,并定容至刻度,摇匀,取续滤液,即得。

    2.4  线性关系考察  分别精密吸取上述丹参酮ⅡA(C=0.008mg/ml)对照品溶液5、8、10、15、20μl进样,按上述色谱条件测定峰面积, 以对照品的进样量(μg)作为自变量(x), 对照品峰面积作为应变量(y),进行回归分析。结果回归方程为y=116.37x +1.3312,r=0.9996。结果表明丹参酮ⅡA进样量在0.06~0.18μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

    2.5  稳定性试验  取样品,按供试品制备方法制备,分别于0、2、4、8h测定峰面积, 结果峰面积的RSD=0.84%,实验结果表明,本品在8h内稳定性良好。

    2.6  精密度试验  精密吸取同一供试品溶液20μl,连续进样5次,记录峰面积,结果峰面积的RSD=1.30%,结果表明仪器精密度良好。

    2.7  重复性试验  取同一批号(050201)本品6份,依供试品制备方法制取样品,依法测定含量,结果6份样品的含量(μg /ml)分别为0.4316、0.4426、0.4411、0.4411、0.4421、0.4298,平均含量为0.4381μg /ml,RSD=1.31%,结果表明,本方法重复性良好。

    2.8  加样回收率试验  取已知含量的样品(批号:050201,丹参酮ⅡA含量为0.4316μg /ml)加入一定量对照品,按供试品制备方法制备样品,测定总量,计算回收率,结果见表1。表1  丹参酮ⅡA加样回收率试验结果结果表明,本方法回收率良好。

    2.9  样品测定  取样品,依供试品制备方法制取供试品溶液,依上述色谱条件测定含量。批号为050202、050203、050205三批样品,其丹参酮ⅡA含量分别为: 0.4622、0.4705、0.4652μg /ml。

    3  讨论

    (1)本方法供试品溶液制备方法简便易行,在该色谱条件下丹参酮ⅡA峰分离效果良好,回收率符合要求,结果理想。

    (2)本品采用中性氧化铝柱洗脱的方法除去蔗糖,把对设备的损害尽可能降到最小程度。由于丹参酮ⅡA对光、热敏感,易分解变质,所以应使用棕色瓶保存样品和对照品。

    (3)根据对流速的考察,发现当流速为0.8ml/min的时候,丹参酮ⅡA分离效果更好,出峰时间更适中。

    【参考文献】

    1  国家药典委员会编.中华人民共和国药典(一部).北京:化学工业出版社,2005,1:56.

    2  郭五保,周鸿,李爱红,等.高效液相色谱法测定复方肾炎片中丹参酮A的含量.陕西中医,2002,23:946.

    (编辑:若  木)

  作者单位: 1 422300 湖南洞口,洞口县人民医院

    2 418008 湖南怀化,怀化学院化学系

作者: 肖俭, 赵子剑 2007-4-26
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