HPLC法测定妇乐颗粒中芍药苷的含量

【摘要】  目的 建立妇乐颗粒中芍药苷的含量测定法。方法 用稀乙醇超声提取样品，用HPLC法测定芍药苷的含量。色谱柱为Hypersil BDS C18（200mm×4.6mm,5μm）柱；乙腈-0.1%磷酸溶液（15:85）为流动相，检测波长230nm，流速为1.0ml/min。结果 进样量在0.1710～3.420μg范围内线性关系良好（r＝0.9997）；平均回收率为97.5%，RSD为1.60%。结论 该方法操作简单，准确可靠，重现性好，可作为妇乐颗粒的质量控制方法。

【关键词】  HPLC法；妇乐颗粒；芍药苷

      妇乐颗粒是由忍冬藤、大血藤、赤芍、牡丹皮、蒲公英、大青叶、川楝子、大黄、制延胡索、甘草等10味中药组成，具有清热凉血、消肿止痛的功效，用于盆腔炎、附件炎、子宫内膜炎等引起的带下、腹痛的治疗。本品收载于《卫生部药品标准中药成方制剂》第八册［1］ ，原标准中无含量测定方法。本文采用稀乙醇超声提取样品，用高效液相色谱法测定其中芍药苷的含量，效果满意，可作为本品的质量控制的方法。

    1   仪器与试药

    高效液相色谱仪：Waters 高效液相色谱系统1525泵，2996型PDA检测器（美国），Empowers 工作站；妇乐颗粒由江西南昌济生制药厂生产；芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所）；乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂为分析纯。

    2   方法与结果

    2.1   色谱条件   色谱柱：Hypersil BDS C18 (200mm×4.6mm,5μm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（15：85）；检测波长：230nm；流速：1.0ml/min；柱温：室温。

    2.2   实验溶液的制备   对照品溶液的制备：精密称取经五氧化二磷减压干燥20h芍药苷对照品17.10mg，置50ml量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取该液5ml，置50ml量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，摇匀备用。供试品溶液的制备：取本品颗粒研细，精密称取1.0g，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，称定重量，超声处理40min，放冷，称定重量，用稀乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液过微孔滤膜（0.45μm），即可。空白对照溶液的制备：精密称取按处方及制备工艺制备的不含赤芍和牡丹皮的样品1.0g，按照供试品溶液制备方法制备空白对照溶液。

    精密吸取对照品溶液、供试品溶液和空白对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，本实验条件下检测，芍药苷的保留时间适当（8.2min），分离度为1.96，理论塔板数为8924，其他成分对芍药苷的测定无干扰，色谱图见图1（略）。

    2.3   线性关系考察   精密吸取芍药苷对照品溶液（0.342mg/ml）5.00ml,置10ml、25ml、50ml、100ml量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，摇匀。制成含芍药苷分别为17.10、34.20、68.40、171.0、342.0μg/ml的溶液。分别精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱峰面积。以色谱峰面积值（Y）为纵坐标，芍药苷的进样量（C）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：

    Y＝1151753.68X-36615.17，r＝0.9997，进样量在0.1710～3.420μg范围，线性良好。

    2.4   精密度试验   取同一供试品溶液，连续进样5次，每次10μl，记录峰面积值， RSD＝1.03%。

    2.5   稳定性试验   取同一供试品溶液，每隔2h进样1次，共6次，记录芍药苷峰面积，RSD=1.00%，表明芍药苷在12h内稳定。

    2.6   重复性试验   取同一批号的样品5份，参照2供试品溶液的制备中的方法制备样品溶液，分别取10μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图，并计算芍药苷含量。结果其含量的RSD=1.12%。

    2.7   回收率试验   精密称取已知含量的同一批号的样品一定量，精密加入一定量的芍药苷对照品，按供试品溶液制备方法制备样品并测定含量，计算回收率，结果见表1。表1   回收率试验结果                        

    2.8   样品测定   取由江西南昌济生制药厂生产的五批样品，按样品供试液制备方法制备，测定芍药苷含量，结果见表2。

    3   讨论

    3.1   用二极管阵列检测器对芍药苷对照品进行200～400nm波长扫描，芍药苷在230nm有较大吸收，并且峰形较好，因此选用230nm波长为检测波长。在流动相选择时，以甲醇和水、乙腈和水配比流动相，芍药苷的峰形拖尾现象较严重。加入磷酸后峰形变得尖锐，并无拖尾。因而选用乙腈和0.1%磷酸溶液配比流动相。

    3.2   对芍药苷的提取，用乙醇、甲醇提取，杂质太多，分离效果不理想。以水提取，再用正丁醇萃取，测定结果偏低，重现性差。本文采用稀乙醇提取，克服了以上不足。

    3.3   加热回流1h与超声处理1h提取进行对照试验，结果回流提取的样品由于糖分太多，影响主测成分芍药苷的分离。超声处理的样品分离效果好，回收率高。对同一样品取样，分别超声处理20、40、60、80min后进行测定，结果超声40min之后，测定结果无明显变化，故选择提取时间为40min。

    3.4   根据文献报道［2,3］ ，处方中赤芍的主要成分为芍药苷，而牡丹皮也含有少量的芍药苷，因此控制其含量有重要意义。本文建立的高效液相测定法，提取方法简单，分离效果好，各项试验效果满意，可作为妇乐颗粒的质量控制方法。

【参考文献】
  1 中国卫生部药典委员会编. 卫生部药品标准中药成方制剂（第八册） ,1993,74.

2 中国医学科学院药物研究所编.中药志（第一册）.北京：人民卫生出版社，1979，186-192.

3 中国医学科学院药物研究所编.中药志（第五册）.北京：人民卫生出版社，1994，405-410.

作者单位：425100 湖南永州，永州市药品检验所