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【摘要】 目的 改善肝复乐片质量标准。方法 采用高效液相色谱法对方中陈皮进行含量测定。结果 橙皮苷平均回收率为98.69%，RSD＝0.95%。结论 结果准确，方法重复性好、稳定，可作为该制剂的质量控制指标。
【关键词】 肝复乐片；橙皮苷；高效液相色谱法；含量测定
【Abstract】 Objective To improve the quality standard for Ganfule Pian.Methods Hesperidin of Pericarpium citri reticulatae was determined by HPLC.Results The average recovery rate of Hesperidin was 98.69%，and RSD was 0.95%.Conclusion The method developed is accurate and the reproducibility is good. The method can be used for quality control of the Ganfule Pian.
【Key words】 ganfule pian;hesperidin; HPLC;determination
肝复乐片是湖南省冷水江市华禾药业有限公司的拳头产品，根据湖南省中医研究院的经方研究开发的。此方主要由党参、鳖甲、重楼、陈皮等21味中药组成，用于肝瘀脾虚为主证的原发性肝癌［1］，具有良好的疗效。陈皮为本处方中的主药，橙皮苷为其主要有效成分。以橙皮苷作为中成药的质控指标，采用HPLC法测定制剂中的橙皮苷，现行标准采用甲醇－4%醋酸溶液为流动相，重现性差，现以甲醇－水为流动相，重现性好，为改善该制剂的质量标准提供了依据。
1 仪器与试药
美国WATERS高效液相色谱仪（1525泵、2487紫外检测器、717自动进样器）;METTLER AG135型天平。
甲醇为色谱纯；水为Ⅰ级纯化水；橙皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110721-200211）；肝复乐片（湖南省冷水江市华禾药业有限责任公司）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱为C18柱（5μl，200mm×4.6mm）（DiamonsilTM）；流动相：甲醇-水（40:60）；流速1.00ml/min;检测波长284nm；柱温：室温（22℃）；进样量：10μl；理论塔板数按橙皮苷计算不低于2000［2］。
2.2 供试品的制备 取批号为20060217的肝复乐片10片，除去包衣，研细，精密称取约0.5g，置50ml容量瓶中，加入甲醇至刻度，密塞，超声30min［1］，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。
2.3 对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品9.08mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取5ml，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度制成对照品溶液。
2.4 线性关系考察 用自动进样器分别进样对照品溶液2.0、 5.0、10.0、15.0、20.0μl，测定峰面积，以进样量μg(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，进行线性回归。橙皮苷的回归方程为：Y＝3315572X-44422 （r=0.998），陈皮苷在0.03632～0.3632μg范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验 取18.16μg/ml的橙皮苷对照品溶液进样，测定峰面积，重复5次，橙皮苷的RSD为1.01%。
2.6 稳定性实验 取2.2项下制备的供试液在配制后1、3、6、10、16h进样一次，测定峰面积，计算供试品中橙皮苷的峰面积RSD为3.76%,见表1、2。表2 求橙皮苷标准品回归方程的测定结果
2.7 阴性对照溶液的制备 取缺陈皮的阴性样品适量，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。
2.8 回收率试验 称取已知含量的已去薄膜衣后研细的供试品（批号20060217）9份，精密称定，分别加入对照品溶液5.00ml，搅拌均匀，挥干甲醇，用甲醇约8ml移置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，密塞，超声30min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀作为供试品溶液，过滤后进样，测定回收率。结果平均回收率为 98.69%，RSD为0.95%，结果见表3。表3 加样回收实验结果
2.9 供试品测定 取供试品3批照2.2项下制备供试品溶液，按上述色谱仪条件测定。外标法定量，结果见表4。表4 3批样品测定结果
3 讨论
3.1 在实验过程中采用多种提取方法进行提取率的比较 甲醇超声提取>70%乙醇回流提取>70%乙醇超声提取。故选用甲醇超声提取。
3.2 色谱条件 原方法采用甲醇－4%醋酸溶液为流动相，经厂家反复试验，在此条件下很难得到重现性好的液相图谱，平衡时间长，保留时间和峰面积变化较大，经测量得该流动相的pH=2.5,而一般色谱柱适宜的pH在3～7之间,因此改用甲醇－水为流动相，色谱图结果表明，平衡时间缩短，保留时间和峰面积的RSD较小，并且主峰拖尾因子T=1.05,峰形对称，积分准确。
由方法学考察结果可见，本法精密度较高，稳定性和重现性好，可用于改善该制剂的质量控制标准。
【参考文献】
1 中华人民共和国卫生部药典委员会编.中华人民共和国卫生部药品标准新药转正标准第十二册，1997,9-12.
2 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）,2005年版. 北京:化学工业出版社,2005,132.
作者单位：417000 湖南娄底，娄底市药品检验所