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【摘要】 目的 确定利咽片的含量测定方法。方法 用反相高效液相色谱法（RP-HPLC），色谱柱为Metachem C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为乙腈－0.05mol/L磷酸二氢钾（30∶70），流速为1.0ml/min，检测波长为346nm。结果 回归方程Y=37.03X+3.2908，R2=0.9999，平均回收率为101.9%，RSD=1.5%（n=9）。结论 RP-HPLC法简便、快速、可靠，可用于利咽片的质量控制。
【关键词】 利咽片；盐酸小檗碱；反相高效液相色谱法
利咽片来源于临床经验方，由黄柏、白芍、射干等十一味中药材经提取精制而成。原临床前药品质量标准采用薄层扫描法测定方中主药黄柏的盐酸小檗碱的含量，供试品溶液的制备方较为繁琐、方法的重现性也较差。为更好地控制该制剂的质量，笔者改用高效液相色谱法测定方中的君药川黄柏中的盐酸小檗碱含量，该法操作简便，重现性好，可作为控制药品内在质量的定量指标。
1 仪器与试药
Agilent 1100系列高效液相色谱仪；SHIMADZU紫外分光光度计；盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110713-200008，供含量测定用）；乙腈（色谱纯）；其他试剂（分析纯）；利咽片（浙江海正药业股份有限公司，批号为020508、020512、020520、040515）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱为Metachem C18柱(4.6 mm×250mm，5μm)，流动相为乙腈－0.05mol/L磷酸二氢钾（30∶70），流速为1.0ml/min，检测波长为346nm。在此条件下，样品中盐酸小檗碱峰与各相邻成分峰能较好地分离，出峰时间适中，峰形极佳，且阴性对照品在保留时间内对测定无干扰（见图1）。
2.2 方法学考察
2.2.1 线性关系考察 取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇溶解并逐级定量稀释制成一系列浓度的供试品溶液，精密吸取上述各溶液10μl，分别注入液相色谱仪。以峰面积为纵坐标、对照品浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=37.03X+3.2908，R2=0.9999。表明盐酸小檗碱在2.6～105.0μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.2.2 定量限及检测限的测定 取上述盐酸小檗碱对照品溶液，用甲醇定量稀释制成一系列浓度的供试品溶液，测定盐酸小檗碱的定量限为1.155ng（S/N=10），检测限为0.2625ng（S/N=3）。
2.2.3 精密度试验 取020508批样品细粉适量，精密称定，照供试品液的制备方法制成每1ml约含盐酸小檗碱40μg的溶液，精密量取10μl，注入液相色谱仪，连续进样6次，结果RSD为0.81%，表明仪器精密度良好。
2.2.4 重复性试验 取同一批号的供试品（批号为020508）细粉适量，精密称取6份，按照供试品液的制备方法制成每1ml约含盐酸小檗碱40μg的溶液，精密量取10μl，注入液相色谱仪。结果平均含量为4.08mg/片，RSD为0.50%。
2.2.5 稳定性试验 取同一批供试品溶液，分别在0、0.5、1、2、4、24h时测定。结果其峰面积基本不变，RSD为0.51%，盐酸小檗碱性质较为稳定。
2.2.6 加样回收率试验 精密称定020508批样品细粉9份，各精密加入盐酸小檗碱对照品溶液(浓度为1.103mg/ml) 0.8ml、1ml、1.2ml，照供试品含量测定方法测定，计算回收率，结果见表1。表1 盐酸小檗碱加样回收率试验结果
2.3 样品含量测定 精密称取经真空干燥24h的盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml中含40μg的溶液，作为对照品溶液。取本品20片，研细，取0.2g，精密称定，精密加入含1%盐酸的甲醇溶液（V/V）50ml，称重，超声处理30min，冷却，用含1%盐酸的甲醇溶液补足减失的重量，滤过，取续滤液作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定含量。结果批号分别为020508、020512、020520和040515的样品中盐酸小檗碱的含量分别为9.83mg/g、10.25mg/g、10.43mg/片和9.75mg/g。
3 讨论
3.1 测定波长的选择 《中国药典》2005年版一部［1］黄柏的含量测定所采用的测定波长为265nm，而本品由十一味中药材组成，组分复杂，在265nm的波长处检测干扰较大。经对盐酸小檗碱对照品的甲醇在200～400nm的波长处进行扫描，结果在346nm处具有最大吸收，故选择346nm作为检测波长。
3.2 提取方法的选择 盐酸小檗碱为强酸弱碱盐，以含1%盐酸的甲醇溶液进行提取有利于盐酸小檗碱的溶出完全，并可显著减少其他杂质峰的干扰。该法与《中国药典》2005年版一部［1］黄柏的含量测定项下采用乙腈-0.1%磷酸溶液为提取溶剂有异曲同工之妙。
3.3 流动相的选择 参照有关文献［1～3］，笔者曾对流动相A［甲醇-乙腈－0.05mol/L磷酸二氢钠溶液（20：30：55）］、B［乙腈-水（每1L水中含磷酸二氢钾3.4g，十二烷基硫酸钠1.7g）（60：40）］和C［乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（30∶70）］进行了比较试验，试验结果表明，本品在3种不同流动相系统中以采用流动相C时分离效果最好。
【参考文献】
1 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）.北京:化学工业出版社, 2005， 214-215.
2 王进, 居文政, 郁锡峰. 复方薤白胶囊中盐酸小檗碱含量测定.时珍国医国药, 2001, 12(8): 37-38.
3 刘腊娥, 陈立新, 蔡亚敏,等. 高效液相色谱法测定肾康口服液中盐酸小檗碱的含量. 中国药房, 2005, 16(2): 136-137.
作者单位：318000 浙江台州，浙江海正药业股份有限公司