HPLC法测定咳特灵胶囊中马来酸氯苯那敏含量及含量均匀度

【摘要】  目的 建立用HPLC法测定咳特灵胶囊中马来酸氯苯那敏含量及含量均匀度。方法 采用Agilent C18(150mm×4.6mm，5μm)色谱柱，检测波长：261nm，甲醇-乙腈-醋酸钠溶液 （取醋酸钠2.72g，加水至1000ml溶解，加三乙胺0.4ml，用冰醋酸调pH值至4.1） (22:22:56)为流动相，流速为0.9ml/min,柱温30℃，进样10μl。外标法测定含量。结果 在18.78～93.92μg /ml范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系，r=0.9999，平均回收率为99.68%(n=6) RSD=0.58%。结论 方法准确可靠，可用于咳特灵胶囊中马来酸氯苯那敏的含量及含量均匀度测定。

【关键词】  高效液相色谱法; 咳特灵胶囊; 马来酸氯苯那敏

    咳特灵胶囊为临床常用止咳、祛痰、平喘药物，由小叶榕干浸膏和马来酸氯苯那敏组成的一个中西药复方制剂。马来酸氯苯那敏系抗组胺药，通过拮抗组胺H1受体而对抗组胺的过敏作用，并具有抗M胆碱受体作用。不良反应有胸闷、咽喉痛、心悸等。马来酸氯苯那敏在胶囊中含量较低，不易混匀。现行标准中采用提取后显色,紫外分光光度法测吸收度,控制马来酸氯苯那敏的含量，未做含量及含量均匀度测定。本文采用高效液相色谱法，对马来酸氯苯那敏进行含量及含量均匀度测定，精密度较高，重现性良好，可有效地对咳特灵胶囊进行质量控制。

    1  仪器与试药、试剂

    1．1  仪器  安捷伦1100系列高效液相色谱仪；Cary-100紫外分光光度计；梅特勒-托利多AG135天平；梅特勒-托列多320pH计。

    1．2  试药与试剂  马来酸氯苯那敏对照品（中国药品生物制品检定所100047-200305，含量：99.3%）；乙腈、甲醇为色谱纯；三乙胺、冰醋酸、醋酸钠均为分析纯；重蒸馏水自制。咳特灵胶囊（A厂：批号20060506；B厂：批号20060402；C厂：批号20060707；D厂：批号20060912；E厂：批号20060905；F厂：批号20060306；G厂：批号20061012）。

    2  色谱条件

    色谱柱：Agilent C18(150mm×4.6mm, 5μm)，柱温30℃，检测波长261nm，流速：0.9ml/min；进样量：10μl。流动相：甲醇-乙腈-醋酸钠溶液（取醋酸钠2.72g，加水至1000ml溶解，加三乙胺0.4ml，用冰醋酸调pH值至4.1）（22：22：56），外标法测定含量。

    3  实验条件考察

    3．1  线性关系试验  精密称取105℃干燥3h的马来酸氯苯那敏对照品23.48mg，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件测定，以对照品浓度（X）为横坐标，以峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：

    Y=7.8611X-9.7262     r=0.9999

    结果表明:马来酸氯苯那敏在18.78～93.92μg/ml范围内呈良好的线性关系。

    3．2  空白干扰试验  取按照咳特灵胶囊处方，配制不含马来酸氯苯那敏的空白胶囊，称取内容物0.3866g，置25ml量瓶中，加流动相15ml，超声10min，再振摇10min，加流动相稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液10μl进样，在马来酸氯苯那敏峰(保留时间为5.8min)处无吸收，空白无干扰。色谱图见图1。

    3．3  精密度试验  精密称取105℃干燥3h的马来酸氯苯那敏对照品24.20mg，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，微孔滤膜过滤，取续滤液10μl进样，重复进样6次，得峰面积的RSD为0.23%。

    图1  空白胶囊色谱图

    3．4  稳定性试验  取精密度试验项下溶液，分别于2、4、6、8、10、16h测定，结果几无变化。

    3．5  加样回收率试验  取咳特灵胶囊20粒，称定装量差异，取内容物研细，混匀，精密称取适量（约相当于0.5粒量），分别置25ml量瓶中，分别精密加入对照品溶液（484μg/ml）2ml,加流动相15ml，超声10min，振摇10min，加流动相稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液10μl进样，测得平均回收率为99.68%，RSD=0.58% (n=6)。

    4  样品含量测定

    取加样回收率试验项下内容物，精密称取适量（约相当于1粒量）分别置25ml量瓶中，加流动相15ml，其余按回收率试验项下操作。同时，精密称取105℃干燥3h的马来酸氯苯那敏对照品2份，同法测定。测得样品中马来酸氯苯那敏含量。结果见表1。对照品及样品图谱分别见图2、图3。表1  咳特灵胶囊中马来酸氯苯那敏含量及含量均匀度测定结果

    5  样品含量均匀度测定

    将样品1粒内容物用流动相定量转移至25ml量瓶，按样品含量测定项下操作，测定结果见表1。

    6  讨论

    6．1  采用紫外分光光度法测得马来酸氯苯那敏在261nm波长处有最大吸收，故采用该波长为检测波长。

    6．2  考察了甲醇-水-36%醋酸（50：50：2）和甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾-三乙胺(10:90:0.22)两个流动相系统，均不能将样品中马来酸氯苯那敏很好地分离出来。

    6．3  采用现行标准测定马来酸氯苯那敏的限度需先提取后显色，再用紫外分光光度法测定吸收度，操作繁琐，重现性差，且吸收度随时间增加而增加，稳定性差。

    6．4  高效液相色谱法测定咳特灵胶囊中马来酸氯苯那敏的含量及含量均匀度，操作简便，灵敏度高，专属性强，重现性好，无空白干扰，可用于质量控制。

    6．5  通过对7个厂家的咳特灵胶囊中马来酸氯苯那敏含量及含量均匀度测定，发现多个厂家药品中马来酸氯苯那敏的含量均较低，且均匀度差，有的1粒含量超过另一粒的1倍。因此，有必要在现行标准中增加马来酸氯苯那敏含量及含量均匀度项目，以保障人民用药的安全、有效。

【参考文献】
  1 车洪勇,杨元玉,冯爱萍.HPLC法测定关节镇痛片中保泰松和马来酸氯苯那敏的含量.中国药事,2003,(3):167.

2 赵新静,陆伟.HPLC法测定感冒通片中马来酸氯苯那敏的含量及含量均匀度.中国药事,2004,(1):41.

作者单位：226006 江苏南通，南通市药品检验所