HPLC法测定抗菌消炎片中黄芩苷的含量

【摘要】  目的 建立HPLC法测定抗菌消炎片中黄芩苷的含量。方法 用Diamonsil C18 （4.6mm×200mm，5μm）色谱柱，流动相：甲醇-水-磷酸溶液（47：53：0.2），流速：1.0ml/min，检测波长：280nm。结果 黄芩苷在0.028～0.448μg范围内与峰面积线性关系好，ｒ=0.99994，平均回收率为99.4%，RSD为0.9%。结论 本法测定简便，结果准确，重现性和分离度好，可用于抗菌消炎片的质量控制。

【关键词】  HPLC;黄芩苷;抗菌消炎片;含量测定

    抗菌消炎片为《卫生部药品标准》中药成方制剂第七册收载的品种［1］，由金银花、百部、黄芩等七味中药组成，具有清热、泻火、解毒的功能。用于风热感冒，咽喉肿痛，实火牙痛。标准中没有定性分析及含量测定方法，不能有效地控制药品质量。方中黄芩清热燥湿，泻火解毒，止血［2］,其有效成分为黄芩苷。我们试用HPLC法测定抗菌消炎片中的黄芩苷含量，取得满意的效果。现报告如下。

    1  仪器与试药

    Shimadzu LC-20A Liquid Chromatograph, Shimadzu SIL-20A Auto Sampler, Shimadzu SPD-M20A Diode Array Detector, Shimadzu CTO-10AS VP Column OvenLC Solution 色谱工作站。水为I级纯化水，甲醇为色谱纯，其他为分析纯。抗菌消炎片购自山东中圣药业股份有限公司（批号：060201 M平=0.2847g，批号：060602 M平=0.3018g，批号：051102 M平=0.2836g）。

　　2  试验方法与结果

    2.1  色谱条件  色谱柱：Diamonsil C18 柱（4.6mm×200mm，5μm），柱温：30℃，流动相：甲醇-水-磷酸溶液（47：53：0.2），流速：1.0ml/min，检测波长：280nm。

    2.2   溶液的制备

    2.2.1  对照品溶液的制备  精密称取黄芩苷对照品14.42mg，加70%乙醇使溶解并稀释至25.00ml，即得（C=0.5768mg/ml）。

    2.2.2  供试品溶液的制备  精密称定相当于1片的重量，置 100ml量瓶中，加70%乙醇约80ml，超声处理30min，放冷，加70%乙醇稀释至刻度，滤过,即得。

    2.2.3  阴性对照溶液的制备  取缺黄芩的处方，按样品溶液制备方法制备阴性对照溶液。

    2.3  系统适用性试验  分别取对照品溶液、样品溶液、阴性对照溶液进样5μl，色谱图见图1。黄芩苷峰保留时间为17.517min，阴性对照色谱图在黄芩苷峰位置无干扰峰，与其他组分分离完全，分离度为6.3。理论板数以黄芩苷峰计算为4864。

    2.4  线性关系考察  精密量取对照品溶液（C=0.5768mg/ml）0.5、1.0、2.0、4.0、8.0ml，分别置50ml量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度，各进样5μl，以峰面积为纵坐标，以进样量为横坐标，进行线性回归，得方程：Y=1.71×103+1.78×107X，ｒ=0.99994，线性范围为0.028～0.448μg。

    2.5  精密度试验  取同一对照品溶液（C=0.02307mg/ml）连续进样5次，每次5 μl，峰面积积分值RSD=1.2%。

    2.6  重复性试验  取同一批号（060201）样品5份，按供试品液制备方法制备，依法测定，结果黄芩苷含量RSD=1.3%，表明本法重现性好。

    2.7  稳定性试验  取同一样品溶液（060602）在0、3、6、12、24、48h分别进样5 μl，依法测定，黄芩苷峰面积RSD=0.7%，表明样品溶液在48h内稳定。

    2.8  加样回收试验  取已知含量的样品（060201），精密加入黄芩苷对照品液适量，按样品测定方法测定含量，计算回收率，结果见表1。

    2.9  样品测定  取3批样品，按2.2.2项下方法制备样品溶液，依法测定黄芩苷的含量，结果见表2。表1  回收率试验结果（略）表2  3批样品含量测定结果（略）

    3  讨论

    用HPLC法测定黄芩苷含量，文献中对黄芩苷的检测波长多在280nm［3］、276nm［4］、274nm［2］，本文对黄芩苷的紫外吸收光谱进行了扫描，结果显示黄芩苷在280nm处吸收峰灵敏度较高，色谱峰最为理想，故确定其最大吸收波长为280nm。

【参考文献】
  1 中华人民共和国卫生部药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂,第七册.北京：人民卫生出版社，1993，75.

2 国家药典委员会.中国药典，一部.北京：化学工业出版社，2005，211；405-407.

3 邓筱华，王建.HPLC法测定清热除湿合剂中黄芩苷的含量.中国药师,2004,6（7）:446-448.

4 张廷明，刘宜升.RP-HPLC法测定化痰止咳片中黄芩苷的含量.中国药师，2004，7（9）:713-714.

作者单位：421001 湖南衡阳，衡阳市药检所