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【摘要】 目的 观察 FTS提高正常动物、荷瘤动物及免疫缺陷型动物自然杀伤性细胞（NK）活性的作用。方法 用正常动物、荷瘤动物及免疫缺陷型动物模型皮下注射不同剂量的FTS后,取其脾NK细胞测定其对靶细胞（L929）的杀伤能力。结果 FTS 2.5mg/kg、1.25mg/kg能够显著地增加正常小鼠及免疫力低下模型小鼠的NK细胞对靶细胞的杀伤能力（P<0.01）。结论 FTS能够提高NK细胞的活性，具有抗肿瘤及免疫增强的作用。
【关键词】 血清胸腺因子；NK；L929；抗肿瘤
Research of FTS for animal enhancement activity of NK cell
LE Jia-jing,ZHANG Lin-ke，XU Kang-sen.National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products, Beijing 100050,China
【Abstract】 Objective Observation the FTS to enhance the normal animal, the Dutch lump animal and the immunodeficiency animal nature killing germ cell （NK） active function.Methods After the normal animal, the Dutch lump animal and immunodeficiency animal model hypodermic injection different dosage of FTS, take its the spleen NK cell to determine it to the target cell （L929） kill capability.Results FTS 2.5mg/kg,1.25mg/kg can obviously increase the normal mouse and the immunity low model mouse’s NK cell to the target cell kill capability （p< 0.01）.Conclusion FTS can enhance the NK cell activeness, has function which the anti-tumor and the immunity strengthen.
【Key words】 FTS;NK;L929;anti-tumor
血清胸腺因子（thymulin,FTS）是胸腺组织中由9个氨基酸残基组成的小分子肽，是一类具有增强机体免疫功能的多肽［1］,自然杀伤细胞（NK）具有抗肿瘤、抗感染和免疫调节功能［2］，是抗肿瘤的免疫监视作用中的第一道防线［3］，因此，NK活性的提高对于机体的抗肿瘤能力的提高是有很积极作用的，本文通过研究FTS对不同模型动物NK细胞活力的影响，了解FTS的免疫调节作用。
1 材料与方法
1.1 药物与试剂 血清胸腺因子（批号060821，由深圳市翰宇生物工程有限公司提供），其纯度为>96%,冻干粉末,冷冻保存，临用前取FTS 1mg，加1ml消毒生理盐水稀释为1mg/ml的原液，供皮下注射用。阳性对照药为胸腺肽，冻干粉末，20mg/支（黑龙江迪龙药业有限公司提供,批号20061001）；环磷酰胺，针剂，10mg/10ml（山西普德药业有限公司提供,批号20060203）；0.1%中性红染液；细胞溶解液（50%醋酸+50%乙醇）；0.25%胰酶；RPMI-1640培养液。
1.2 瘤株 小鼠H22，取接种于小鼠的腹腔第7天的瘤株,配成106/ml瘤细胞悬液，接种于小鼠前肢腋窝皮下0.2ml/鼠。
1.3 靶细胞（L929） 实验前一天换液，用0.25%胰酶消化后，用含10%小牛血清的RPMI-1640稀释成1×105/ml。
1.4 动物 实验用体重18～20g的SPF级雄性昆明小鼠，动物合格证号：SCXK京（2005-2006），均由中国药品生物制品检定所实验动物中心提供。饲养观察2天后使用。实验动物室为无菌空气二级过滤，人工日光灯12h自动照明，恒温、恒湿送风，温度22～24℃，相对湿度40%～45％。鼠笼具为塑料盒,不锈钢丝盖。
1.5 免疫缺陷型动物模型 用18～20g的昆明小鼠称重后皮下注射环磷酰胺，剂量为80mg/kg,给药体积0.1ml/10g,5天后称重，将体重降低的小鼠随机分组用于实验。
1.6 剂量设置 根据药效曲线结果设置剂量为高、中、低三个剂量组，小鼠给药剂量2.5、1.25、0.63mg/kg，给药体积为0.1ml/10g。阳性对照药胸腺肽，临用前配成13mg/ml，小鼠皮下0.1ml/10g，剂量为130mg/kg。空白对照用NS，药液临用时根据动物个体体重调整给药体积。
1.7 给药方法 分别取接种H22瘤株24h后的昆明小鼠，健康动物及免疫缺陷型动物各50只，均分为5组，分别按高、中、低3个剂量注射FTS，对照组注射NS，用胸腺肽做阳性对照，均皮下注射给药，每天给药1次，共给药14天。
1.8 小鼠脾NK细胞的制备 将给药后的小鼠断颈放血，取脾置于无血清RPMI-1640培养液中去杂质，研磨成单个细胞后用100目筛及200目筛过滤，将滤液1000rpm,5min离心，去上清，除红细胞后，用无血清RPMI-1640培养液洗1次，最终用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液配成0.5×107/ml。
1.9 检测指标 用酶标仪在490nm测定各组的OD值，杀伤率%=靶细胞OD值-实验组OD值/靶细胞OD值。实验数据用x±s表示，组间比较用t检验。
2 方法与结果
将L929细胞加入96孔板，100μl/孔，37℃，5% CO2培养4h，使其贴壁，然后实验孔每孔加入100μl脾NK细胞，对照孔加入无血清RPMI-1640培养液100μl，37℃，5% CO2培养24h，取出，弃上清，用NS洗3次，滤纸吸干。加入中性红100μl/孔，37 ℃， 30min，弃上清，用NS洗3次，加入细胞裂解液100μl/孔，混匀后，用490nm测各孔的OD值。
2.1 FTS对正常小鼠NK细胞活性的影响 制备实验到期的正常小鼠的脾NK细胞，按实验方法进行实验，结果见表1。表1 FTS对正常小鼠NK细胞活性（略）注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01
由表1可见，与NS组比较，FTS 2.5mg/ml可以极显著地增强正常小鼠NK细胞的活性，而胸腺肽没有显著的增强作用。
2.2 FTS对免疫缺陷型小鼠NK细胞活性的影响 制备实验到期的免疫缺陷型小鼠的脾NK细胞，按实验方法进行试验，结果见表2。表2 FTS对免疫缺陷型小鼠NK细胞活性的影响 （略）注：与对照组比较，**P<0.01
由表2可见，与NS组比较，FTS 2.5mg/ml、1.25mg/ml可以极显著地增强免疫缺陷型小鼠NK细胞的活性，而胸腺肽的增强作用较弱，与对照组比差异无显著性。
2.3 FTS对荷瘤小鼠NK细胞活性的影响 制备实验到期的H22荷瘤小鼠的脾NK细胞，按实验方法进行试验，结果见表3。表3 FTS对荷瘤小鼠NK细胞活性的影响 （略）注：与对照组比较，**P<0.01
由表3可见，FTS 2.5mg/ml、1.25mg/ml可以对荷瘤小鼠NK细胞的活性表现出极显著的增强作用，而胸腺肽没有显著的增强作用。3 结论
由实验1～3可知，FTS各剂量间呈现量效关系，高、中剂量组可以显著地增强免疫缺陷型小鼠、荷瘤小鼠及正常小鼠NK细胞的杀伤能力（P<0.01）。FTS高剂量对免疫缺陷型小鼠（80.3%）及荷瘤小鼠（79.8%）NK活性能力的提高比对正常小鼠（47.9%）要高得多，由此可见，FTS对免疫力低下的机体的作用是很显著的，有利于恢复已降低的免疫功能［4～6］，FTS 2.5mg/ml、1.25mg/ml可以明显增强和恢复荷瘤小鼠NK细胞对靶细胞（L929）的杀伤作用。从结果中还可知，FTS是从胸腺提取出来的，但是它对提高机体的NK活性作用确是胸腺肽所不能比拟的，而且使用剂量（高剂量）也比胸腺肽要小52倍，大大减小了药物的副作用， 这些特征可以为FTS今后发展为一类抗肿瘤的新药打下很好的基础。
【参考文献】
1 JF Bach, M Dardenne, JM Pleau. Biochemical characterization of a serum thymic factor.Nature, 1977, 266（3）:55-56.
2 P Merlino, JA Marsh. Evidence for the direct action of thymulin on avian NK cells. Develop Comp Immunol,2001,25:337-343.
3 P Merlino, JA Marsh. Evidence for the direct action of thymulin on avian NK cells. Develop Comp Immunol, 2001, 25:337-343.
4 左增艳，柳钟勋.新型生物反应调节剂、当归多糖（ASDP）抗肿瘤作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响.中国免疫学杂志，2000，16（10）:545-546.
5 徐叔云,卞如濂,陈修. 药理学实验方法学.北京：人民卫生出版社，2002,1762-1763.
6 陈奇.中药药理研究方法学.北京：人民卫生出版社，2006,1006-1012.
作者单位：100050 北京，中国药品生物制品检定所