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【摘要】 测定百参口服液中的多糖含量以及稳定性。方法 采用苯酚-硫酸显色法对多糖进行含量测定；对口服液做影响因素实验，测定其在高温、高温和光照条件下的稳定性。用紫外分光光度计测定多糖的含量。结果 多糖的线性范围2～10μg/ml，相关系数r=0.9991，加样回收率为98.59%，RSD为0.81%，初步稳定性实验表明，口服液在高温、高湿和光照条件下稳定。结论 苯酚-硫酸显色法测定百参口服液中的多糖，操作简单，灵敏度高，多糖制剂质量稳定。
【关键词】 百参口服液 多糖 含量测定 稳定性
【Abstract】 Objective To determine and study on content and stability of the polysaccharide of baishen oral liquid.Methods The method of phenol-sulfuric was used to determine the polysaccharide content and the influencing factor experiment was done to determine the stability under high temperature, high humidity level and illumination condition. The content of polysaccharide was determined by UV-spectrophotometry. Results The linear range was 2～10μg/ml（r=0.9991）,the average recovery was 98.59%with RSD=0.81%.The preliminary stability research indicated that baishen oral liquid was stable under high temperature, high humidity level and illumination condition.Conclusion The method of phenol-sulfuric to determine the polysaccharide content is simple and high sensitivity. The preparation of polysaccharide has stable quality.
【Key words】 baishen oral liquid ;polysaccharide; content determination; stability
百参口服液是以百合、沙参、玉竹、山药等药材组成，具有抗衰老、提高免疫力的功效，用于提高生活质量，起主要作用的是其多糖成分，研究表明多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老等多种药理作用［1，2］。本文对百参口服液用苯酚-硫酸法［3］对有效成分多糖进行含量测定，方法简便、准确、专属性强，可用于百参口服液的质量控制。现报告如下。
1 仪器与试药
UV-1型三用紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂）；FA2004电子分析天平（上海恒平科学仪器有限公司）；101-1型恒温干燥箱（江苏省金坛市大地仪器厂）；百参口服液（自制）；D-无水葡萄糖对照品，试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2．1 含量测定 采用苯酚-硫酸法对百参口服液中的多糖进行含量测定，以葡萄糖作为标准品。
2．1．1 5%苯酚溶液的配制 取苯酚100g，加铝片0.1g，碳酸氢钠0.05g，蒸馏收182℃馏分，称取此馏分10g，加蒸馏水190g，溶解，摇匀，置于棕色瓶中备用。
2．1．2 葡萄糖对照品溶液的制备 精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg，置于100ml容量瓶中，加入蒸馏水稀释至刻度，摇匀，备用。
2．1．3 供试品液的制备 精密称取干燥至恒重的粉末100ml置于100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀即得。移取1.0ml样品溶液置于50ml容量瓶中，加入蒸馏水稀释至刻度摇匀，摇匀，备用。
2．1．4 吸收波长的选择 精密吸取葡萄糖标准品溶液0.1ml，置于10ml具塞刻度试管中，精密加入5％苯酚溶液1.0ml,然后迅速精密加入浓硫酸5.0ml，摇匀，微振5min，定容，置于沸水浴中加热15min，取出，置于冷水中冷却30min，取出，定容。在紫外可见分光光度计上测定在440～512nm波长之间的吸光度。吸收结果见图1。可见，在490nm处有最大吸收，故选择在490nm波长处测定。
2．1．5 标准曲线的绘制 精密吸收葡萄糖标准溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，分别置于50ml容量瓶中，加入蒸馏水并稀释至刻度，摇匀。精密吸取各浓度溶液2.0ml，置于10ml具塞刻度试管中，分别加入5%苯酚溶液1ml，摇匀，迅速加入5ml浓硫酸，摇匀，微振5min，定容。置于沸水浴中加热15min，然后至冷水浴中冷却30min，取出，定容。随行空白。在490nm处测定吸光度A值。以葡萄糖用量（浓度）为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线，见图2。 数据经回归处理后，得回归方程y=13.138x+0.0147，r=0.9991。由图2可见，葡萄糖标准品在2～10μg/ml范围内呈良好线性关系。
2．1．6 多糖含量的测定 精密称取样品溶液0.5ml，按照“标准曲线的绘制”项下的方法测定吸光度值，计算葡萄糖的质量浓度，得出换算因子f。然后精密吸取供试品溶液2.0ml，置于10ml具塞刻度试管中，按照“标准曲线的绘制”项下的方法，测定吸光度A值（平行测定3次）。按照公式：多糖含量=C×D×f／W ×100％（C：样品溶液的葡萄糖的质量；D：样品溶液的稀释倍数；f：换算因子；W：样品的质量）经计算，求得供试品中多糖的质量分数为87.6％。
2．1．7 精密度试验 精密吸取多糖供试品溶液2.0ml，按照“标准曲线的绘制”项下方法测定吸光度A值，平行测定6次，结果RSD=1.39％，表明用该方法测定样品中多糖的含量精密度良好。
2．1．8 稳定性试验 取供试品溶液适量，按照“供试品溶液的制备”及“标准曲线的绘制”项下的方法，测定吸光度A值，每隔1h测定1次，共测5次。RSD=1.03％，表明供试品4h内稳定。
2．1．9 回收率试验 精密称取多糖样品6份，每份500mg，精密称定，置于50ml容量瓶中，分别加入葡萄糖标准品溶液1.5ml，加入蒸馏水至刻度，摇匀，制得供试品溶液，按照“标准曲线的绘制”项下的方法操作，测定吸光度A值。本实验数据经公式（回收率=实验测值-供试品所含被测成分量/加入葡萄糖的量）换算得出平均回收率为98.59%，RSD为0.81%。见表1。 表1 回收率测定结果
2．2 百参口服液稳定性的研究 对药物制剂的基本要求应该是安全、有效、稳定。药物制剂稳定性对保证制剂安全有效是非常重要的。因此，进行了初步稳定性的研究，进行影响因素实验，包括强光照射、高温和高湿度实验。
2．2．1 高温实验 将样品置小瓶中，摊成5mm厚，分别于40℃和60℃恒温箱内放置10天，于0、5、10天分别取样检查，和0天样品对比，记录产品的性状、内容物色泽和含量的变化，结果见表2［高温实验：40℃（A）、60℃（B）］。实验结果表明：本品分别在40℃和60℃高温条件下放置19天，各项指标均无明显变化。表2 高温实验结果
2．2．2 高湿实验 将样品置小瓶中，摊成5mm厚，分别放置于含氯化钠饱和溶液（相对湿度为75%）及硝酸钾饱和溶液（相对湿度为92.5%）密闭容器中，在25℃的恒温条件下放置10天，于0、5、10天分别取样检查，和0天样品对比，记录产品的性状、内容物色泽和含量的变化，结果见表3［氯化钠的饱和溶液：（C），硝酸钾的饱和溶液：（D）］。实验结果表明：在高温条件下放置10天，吸湿性强但仍在5％之内，其他各项指标均无明显变化。表3 高湿实验结果
2．2．3 光照实验 将样品置小瓶中，摊成5mm厚，放置于光橱内，于光照4000LX灯下，光照10天，于0、5、10天分别取样检查，和0天样品对比，记录样品的性状、内容物色泽和含量的变化，结果见表4。实验结果表明：在强光条件下放置10天，各项指标均无明显变化。 表4 光照实验结果
3 结果与讨论
苯酚-硫酸显色法测定百参口服液中的多糖，操作简单，灵敏度高， 在线性关系、稳定性及回收率等方面令人满意，可用于百参口服液的含量测定。
苯酚-硫酸法测定多糖含量的原理是糖在浓硫酸作用下脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，此物质能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10～100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，在490nm处有最大吸收峰，故可用比色法在此波长处进行测定。在对多糖进行含量测定时，浓硫酸加入方式的选择：实验发现，加入浓硫酸的操作方法是影响显色结果的主要因素。常规加入方法引起显色结果不平行，采用移液管悬空，垂直加入浓硫酸，立即摇匀的方式，都能得到稳定的显色结果，高温、高温和光照实验表明多糖制剂质量稳定。
【参考文献】
1 许士凯．现代抗衰老中药复方制剂研究进展．现代中西医结合杂志，2005，14（13）：1669-1671．
2 赖宾．中药及天然药物中多糖类成分药理研究概况．首都医药，2001，（5）：52．
3 可世麟，赵春桂．苯酚－硫酸比色定糖法的应用．生物化学与生物物理进展，1986，（5）：68-69．
作者单位：154002 黑龙江佳木斯，佳木斯大学