高效液相色谱法测定救尔心胶囊中丹参酮ⅡA的含量

【摘要】  建立用高效液相色谱法测定救尔心胶囊中丹参酮ⅡA的含量。方法与结果 用ODS C18柱；甲醇-水（75：25）为流动相。丹参酮ⅡA在4.492～224.6μg/ml范围内，进样量与峰面积有良好的线性关系（n=6，r=0.9999）。回收率为99.29％，RSD为1.1％（n=6）。测定三批救尔心胶囊中丹参酮ⅡA含量均大于98％。结论 方法简便准确，可以作为救尔心胶囊中丹参酮ⅡA的含量测定方法。

【关键词】  丹参酮ⅡA 救尔心胶囊 高效液相色谱法

    救尔心胶囊是由丹参、三七、红花等六味药材组成的复方制剂。具有活血通脉，化瘀生新的功效。用于冠心病、心绞痛。

    该制剂收载于卫生部药品标准中药成方制剂第九册，无含量测定方法。为了有效控制药品质量，提高该制剂的质量标准，本文采用高效液相色谱法测定制剂中丹参酮ⅡA的含量，结果表明，该方法、准确、简便、可行。

    1  仪器与试药

    1100AHT高效液相色谱仪（美国Agilent），MV2550紫外分光光度计（日本岛津），LC-250超声清洗机（250w 50Hz济宁市中区鲁超仪器厂）

    丹参酮ⅡA对照品（中国药品生物制品检定所，批号110766-200415，供含量测定用），救尔心胶囊（哈高科佳木斯中药有限公司，批号：070618、070619、070620）。甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯。

    2  方法与结果

    2.1  色谱条件  色谱柱：Agilent Extend ODS C18  4.6mm×250mm,5μm；流动相：甲醇-水（75：25）；流速：1.0ml/min；检测波长：270nm；柱温：室温；进样量：10μl；理论板数按丹参酮ⅡA计算不低于2550。丹参酮ⅡA与相邻的杂质峰的分离度为8.64。

    2.2  对照品溶液的制备  精密称取丹参酮ⅡA对照品约10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每ml含丹参酮ⅡA16μg）。

    2.3  供试品溶液的制备  取本品装量差异项下的内容物，研匀，取约1g精密称定，置具塞锥型瓶中，精密加入甲醇25ml，超声处理30min，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用少量甲乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

    2.4  阴性对照溶液的制备  按救尔心胶囊处方比例投入缺丹参的其他药味和辅料，按生产工艺和供试品溶液的制备方法制备，即得。

    2.5  干扰试验  取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液按上述色谱条件依法测定，结果见图1。供试品色谱图中与对照品溶液有相同保留时间的色谱峰，而阴性无干扰。

    图1  救尔心胶囊HPLC色谱图

    a-对照品  b-样品  c-阴性样品  1-丹参酮ⅡA2.6  线性关系考察  精密吸取丹参酮ⅡA对照品储备液（0.2246mg/ml）0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、15.0、25.0ml，分别置25ml棕色瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件依法进行测定，以峰面积为纵坐标，对照品浓度（μg/ml）为横坐标作线性回归。得回归方程：Y=57693X-2736.2，r=0.9999。结果表明丹参酮ⅡA在4.492～224.6μg/ml范围内呈良好的线性关系。

    2.7  精密度试验  取同一供试品（批号：070618）溶液，按上述色谱条件依法进行测定，连续重复进样6次，测得丹参酮ⅡA平均峰面积为645108，RSD为1.2%。

    2.8  重复性试验  称取同一样品（批号070618）6份，按2.3项制备供试品溶液，按上述色谱条件依法进行测定，计算含量，结果丹参酮ⅡA平均含量为0.069mg/粒，RSD=0.7%。

    2.9  稳定性试验  称取样品（批号：070618）一份，按“2.3”项下制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，每隔2h进样一次，侧得峰面积平均值为639793，RSD=1.1%（n=12次），表明样品在24h内稳定。

    2.10  回收率试验  采用加样回收试验，精密称取已知含量的样品（批号070618）6份（每份约0.5g）,精密加入丹参酮ⅡA对照品，按“2.3”项下制备供试品溶液，按上述色谱条件依法测定丹参酮ⅡA的含量，并计算回收率，测定结果见表1。表1  回收率试验结果 

    2.11  样品测定  取三批样品，按“2.3”项下制备供试品溶液，按上述色谱条件依法进行测定，以外标法计算含量，结果见表2。表2  样品的测定结果

    3  讨论

    3.1  检测波长的选择  取丹参酮ⅡA对照品的甲醇溶液，经岛津ΜV－2550型可见紫外分光光度计，在220～320nm范围内扫描，其最大吸收为270nm，并参考《中国药典》［2］中丹参酮ⅡA的测定波长，故选择其测定波长为270nm。

    3.2  流动相的选择  经多种比例流动相选择，认为甲醇－水（75：25）为最佳，此条件下可免除干扰，使样品中丹参酮ⅡA与其他组分均能达到基线分离，分离度大于1.5。故采用甲醇－水（75：25）为流动相。

【参考文献】
  1 卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第八册，1993,165.

2 国家药典委员会.中国药典, 一部,2005版.北京：化学工业出版社，2005，52-53.

作者单位：154007 黑龙江佳木斯，佳木斯市药品检验所