点击显示 收起
【摘要】 建立用高效液相色谱法测定救尔心胶囊中丹参酮ⅡA的含量。方法与结果 用ODS C18柱;甲醇-水(75:25)为流动相。丹参酮ⅡA在4.492~224.6μg/ml范围内,进样量与峰面积有良好的线性关系(n=6,r=0.9999)。回收率为99.29%,RSD为1.1%(n=6)。测定三批救尔心胶囊中丹参酮ⅡA含量均大于98%。结论 方法简便准确,可以作为救尔心胶囊中丹参酮ⅡA的含量测定方法。
【关键词】 丹参酮ⅡA 救尔心胶囊 高效液相色谱法
救尔心胶囊是由丹参、三七、红花等六味药材组成的复方制剂。具有活血通脉,化瘀生新的功效。用于冠心病、心绞痛。
该制剂收载于卫生部药品标准中药成方制剂第九册,无含量测定方法。为了有效控制药品质量,提高该制剂的质量标准,本文采用高效液相色谱法测定制剂中丹参酮ⅡA的含量,结果表明,该方法、准确、简便、可行。
1 仪器与试药
1100AHT高效液相色谱仪(美国Agilent),MV2550紫外分光光度计(日本岛津),LC-250超声清洗机(250w 50Hz济宁市中区鲁超仪器厂)
丹参酮ⅡA对照品(中国药品生物制品检定所,批号110766-200415,供含量测定用),救尔心胶囊(哈高科佳木斯中药有限公司,批号:070618、070619、070620)。甲醇为色谱纯,其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:Agilent Extend ODS C18 4.6mm×250mm,5μm;流动相:甲醇-水(75:25);流速:1.0ml/min;检测波长:270nm;柱温:室温;进样量:10μl;理论板数按丹参酮ⅡA计算不低于2550。丹参酮ⅡA与相邻的杂质峰的分离度为8.64。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取丹参酮ⅡA对照品约10mg,置50ml棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得(每ml含丹参酮ⅡA16μg)。
2.3 供试品溶液的制备 取本品装量差异项下的内容物,研匀,取约1g精密称定,置具塞锥型瓶中,精密加入甲醇25ml,超声处理30min,放冷,滤过,滤液置50ml量瓶中,用少量甲乙醇分次洗涤容器和残渣,洗液滤入同一量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。
2.4 阴性对照溶液的制备 按救尔心胶囊处方比例投入缺丹参的其他药味和辅料,按生产工艺和供试品溶液的制备方法制备,即得。
2.5 干扰试验 取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液按上述色谱条件依法测定,结果见图1。供试品色谱图中与对照品溶液有相同保留时间的色谱峰,而阴性无干扰。
图1 救尔心胶囊HPLC色谱图
a-对照品 b-样品 c-阴性样品 1-丹参酮ⅡA2.6 线性关系考察 精密吸取丹参酮ⅡA对照品储备液(0.2246mg/ml)0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、15.0、25.0ml,分别置25ml棕色瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。按上述色谱条件依法进行测定,以峰面积为纵坐标,对照品浓度(μg/ml)为横坐标作线性回归。得回归方程:Y=57693X-2736.2,r=0.9999。结果表明丹参酮ⅡA在4.492~224.6μg/ml范围内呈良好的线性关系。
2.7 精密度试验 取同一供试品(批号:070618)溶液,按上述色谱条件依法进行测定,连续重复进样6次,测得丹参酮ⅡA平均峰面积为645108,RSD为1.2%。
2.8 重复性试验 称取同一样品(批号070618)6份,按2.3项制备供试品溶液,按上述色谱条件依法进行测定,计算含量,结果丹参酮ⅡA平均含量为0.069mg/粒,RSD=0.7%。
2.9 稳定性试验 称取样品(批号:070618)一份,按“2.3”项下制备供试品溶液,按上述色谱条件进行测定,每隔2h进样一次,侧得峰面积平均值为639793,RSD=1.1%(n=12次),表明样品在24h内稳定。
2.10 回收率试验 采用加样回收试验,精密称取已知含量的样品(批号070618)6份(每份约0.5g),精密加入丹参酮ⅡA对照品,按“2.3”项下制备供试品溶液,按上述色谱条件依法测定丹参酮ⅡA的含量,并计算回收率,测定结果见表1。表1 回收率试验结果
2.11 样品测定 取三批样品,按“2.3”项下制备供试品溶液,按上述色谱条件依法进行测定,以外标法计算含量,结果见表2。表2 样品的测定结果
3 讨论
3.1 检测波长的选择 取丹参酮ⅡA对照品的甲醇溶液,经岛津ΜV-2550型可见紫外分光光度计,在220~320nm范围内扫描,其最大吸收为270nm,并参考《中国药典》[2]中丹参酮ⅡA的测定波长,故选择其测定波长为270nm。
3.2 流动相的选择 经多种比例流动相选择,认为甲醇-水(75:25)为最佳,此条件下可免除干扰,使样品中丹参酮ⅡA与其他组分均能达到基线分离,分离度大于1.5。故采用甲醇-水(75:25)为流动相。
【参考文献】
1 卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第八册,1993,165.
2 国家药典委员会.中国药典, 一部,2005版.北京:化学工业出版社,2005,52-53.
作者单位:154007 黑龙江佳木斯,佳木斯市药品检验所