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【关键词】 血小板聚集
血小板聚集是指血小板与血小板之间相互粘附形成血小板团的功能，血小板聚集特性是其参与止血与血栓形成过程中最重要的因素之一。血小板聚集率的测定是一种功能性测定，是血小板活化及其释放反应，膜糖蛋白受体等综合因素的共同表现，是血小板功能检测的基础。临床上诊断血小板功能异常的疾病时，例如一些血栓前状态和血栓性疾病，通常可采用血小板聚集试验作初筛试验。
1 血小板聚集检测的方法学
1.1 比浊法 比浊法［1］检测血小板聚集是一种比较广泛的检测血小板聚集功能的方法。血小板的聚集可以由于各种诱导剂与血小板膜受体之间的相互作用，这种相互作用通过膜的传递而激活血小板，使其膜表面另一个受体糖蛋白Ⅱb/Ⅲa活化，再与血浆中的纤维蛋白原结合，介导血小板聚集。
将富血小板血浆（PRP）置于比色管中，加入诱聚剂（主要有ADP、肾上腺素、胶原、花生四烯酸等），用一涂硅的小磁粒进行搅拌，血小板逐渐聚集，血浆浊度降低，透光度增加，记录此变化，形成血小板聚集的动态曲线，不同诱聚剂可产生不同类型的血小板聚集曲线。
比浊法检测血小板聚集是近几十年在临床和研究中最常用的方法，利用血小板聚集仪能够比较方便、快速地获得血小板聚集情况而评价血小板的聚集功能，其不足是离心等步骤容易导致血小板体外激化，对血小板聚集物的形成不敏感，而且重量大的血小板容易丢失，重复性不是很好，乳糜和溶血标本影响比浊结果，需要较多的血液量。
1.2 剪切诱导血小板聚集测定法 近年来，研究发现如果血小板受到高剪切力作用，在无诱导剂的情况下也会发生不可逆的聚集，这种聚集是由vWF中介的，在高剪切力作用下，vWF伸展其巨大的丝状物，增加了结合血小板受体的数量与相互作用力，使血小板聚集功能有效地对抗流体剪切力的血小板解聚作用。
剪切诱导的血小板聚集［2］被认为是动脉性血栓如心梗和脑血栓等形成过程的一个重要病理因素而引起临床重视。在脑血管动脉血栓性疾病的病理过程中，血小板的活化是重要的始动因素。正常老年人的血液可能处于高粘、高凝和易于形成血栓的倾向，这种倾向是否会转入病理状态则取决于血液、血液与血管间的相互作用。老年人血管往往存在着动脉粥样硬化等退行性变化，血管的局部狭窄可形成血流的高剪切应力，另外，由于狭窄处或分叉处的血流易发生湍流，加之动脉内的血流本来就是潮汐式流动，血小板承受的切变力并不是恒定、单向性的，而是经常变动的，所以在这些部位附近最易发生剪切诱导的血小板聚集，是血栓形成的重要原因之一。研究剪切诱导的血小板聚集及其对策对血栓性疾病的防治具有重要意义。但温度和血小板数目对此法检测结果都有较大的影响。
1.3 散射性粒子检测法 散射性粒子检测法［1］是根据血小板聚集过程中散射光的变化来进行检测。将半导体激光（波长675nm）通过聚光镜折射成宽度约50μm的带状光束，照射到装有PRP的比色杯。血小板聚集块的大小及数量与散射强度是高度一致的，测定方法与比浊法相似。此方法能测定散射光的强度和分布情况，即能通过测得聚集块的大小及生成数量这2个指标来评价血小板的凝聚功能。
1.4 发色底物/发光物聚集法 发色底物/发光物聚集法［4］可同时测定血小板聚集和致密颗粒的分泌，后者的检测是通过测定发色底物的吸光度的改变来推算所测物质的含量和活性。发色底物法是由一个405nm的检测光源与另一探测器成180°角，在一定条件下记录405nm波长下由于产色基团对硝基苯胺（PNA）被活性酶裂解释放而导致的吸光度的变化速度，而引起PNA 释放的活性酶量与待测样本中某一成分的量呈相关关系。发光物法原理相似，以检测ATP释放为例，在PRP中预先加入虫荧光素-荧光素酶，在测定血小板聚集能力的同时，血小板活化时释放出的ATP与荧光素发生反应产生荧光，通过检测荧光强度可以了解血小板活化时释放出的ATP的量。
1.5 血小板计数法 血小板计数法［1］将抗凝全血置于含有旋转离心磁棒的聚苯乙烯试管中，用甲醛固定单个血小板、测定血小板基数值，加入诱聚剂后的不同时间，测定聚集后血小板数目，进行前后比较，得出血小板数目减少的百分率，根据此百分率可得到血小板的聚集率。此法敏感、迅速、所需样本量少，可对小聚集物进行动态检测。
1.6 微量反应板法 微量反应板法［1］是用微量反应板酶标仪比浊法测定血小板聚集率。该方法的最大优点是1次可以测定多个样品，特别适合于临床和科研对批量血小板聚集率的测定。但要求血小板计数在一定范围内结果才比较准确。
1.7 全血电阻抗法 全血电阻抗法［1］是应用电阻抗原理设计的检测全血血小板聚集功能的仪器。它是通过记录浸泡于血液电极间的微小电流或电阻变化而形成的聚集曲线，来观察体外血小板聚集变化。该方法的最大优点可直接使用全血进行测定。但不足之处是光学聚集仪耗时，对小聚集物的形成不敏感，使其难以满足临床工作的需要［4］。
1.8 流式细胞术 流式细胞术［3］，在适当波长的激发光作用下，被特殊染色的细胞发射出一定量的荧光脉冲讯号。探测器收集每个细胞的荧光讯号和光散射，然后传入计算机进行分析。以单个血小板数量的减少衡量血小板聚集率的大小。
与常规血小板功能测定法相比，全血法流式细胞术具有重复性好、敏感性高、检测需血量少等优点，尤其适合于新生儿和血小板减少性疾病患者。但该方法同样存在不足之处，例如流式细胞仪价格昂贵、检测费用高、仪器操作复杂等。虽然存在着这些不足，但本法仍是血小板功能检测的突破性进展。
2 血小板聚集检测的临床应用
血小板聚集的检测对于评价血小板功能，以及对出血性疾病的诊断和鉴别诊断具有重要的意义［5］。目前血小板聚集功能的检测已经从传统的手工法发展到全自动仪器的检测，从单一的比浊法发展到阻抗法、剪切法、流式细胞术法等，从富含血小板血浆（PRP）法发展到全血法，从单一的测定血小板聚集功能发展到能同时检测血小板释放ATP和血小板内Ca2+的含量。今后血小板聚集实验将朝着更准确、便捷、多功能的方向发展，为临床疾病的诊断起到更有价值的指导作用。
【参考文献】
1 刘毅敏，覃军. 血小板聚集检测方法进展.检验医学，2004，19（4）:383.
2 廖福龙，李斌. 血小板聚集检测方法新进展―剪切诱导血小板聚集测定法.中国血液流变学杂志，2000，10（1）:1.
3 丛玉隆，李绵洋. 流式细胞术测定血小板聚集探讨.临床检验杂志，2003，18（5）:25.
4 Shiozaki T,Nakajimay Y,Taneda M,et al.Efficacy of moderate hypotherinia in patients with severe head injury and intracranial hyertension refeactory to mild hypothermia.J Neurosurg,2003,99（1）:47-51.
5 晋兴，曹义战，安良.观测外周血血小板、白细胞数量及平均血小板体积对脑梗死的意义.现代检验医学杂志，2006，21（4）:59-60.
作者单位：201318 上海，上海市南汇区周浦医院检验科