HPLC法测定醋氯酚酸片中有关物质

【摘要】  用高效液相色谱法测定醋氯酚酸片中有关物质。方法 选用Waters C18 （3.9mm×150mm，5μm）色谱柱；流动相为0.0025mol/L醋酸钠溶液-甲醇-冰醋酸（32：68：0.3）； 检测波长为275nm； 流速为1.0ml/min；柱温为40℃。结果 醋氯酚酸的保留时间约7min；有关物质双氯酚酸钠和未知杂质的保留时间约6min与9min；有关物质双氯酚酸钠线性范围：0.5～4.0μg/ml,Y=1.99E+004X-3.96E+003，r= 0.9990。结论 本方法简便、准确, 适于醋氯酚酸片有关物质的测定。

【关键词】  醋氯酚酸 双氯酚酸钠 高效液相色谱（HPLC）法 有关物质

    【Key words】  aceclofenac;diclofenac sodium ;HPLC;related substance

    醋氯酚酸属苯乙酸类非甾体抗炎镇痛药，为双氯酚酸的衍生物，用于急性炎症、关节炎和疼痛的治疗。有报道含量测定采用高效液相色谱法［1，2］；有关物质采用薄层色谱法［3，4］。本试验采用不同于报道的流动相对有关物质进行测定，结果表明：本实验条件合理、有效，可将双氯酚酸钠及未知杂质与醋氯酚酸分离,测定结果准确、可靠。现报告如下。

　　1  仪器与试药

    高效液相色谱仪为Waters2695和Waters2996二极管阵列紫外/可见检测器，高效液相色谱柱为Waters C18 （3.9mm×150mm，5μm）。甲醇为色谱纯， 冰醋酸、无水醋酸钠均为分析纯。对照品醋氯酚酸、双氯酚酸钠均为中国药品生物制品检定所提供,含量分别为99.2%、100.0%；供试品醋氯酚酸片3批，批号为H40024（A）、H40025（B）、H40026（C）。

    2  方法与结果［1，2］

    2.1  色谱条件与系统适用性试验  色谱柱温为40℃； 流动相为0.0025mol/L醋酸钠溶液-甲醇-冰醋酸（32：68：0.3）； 检测为波长275nm；流速为1.0ml/min；进样量10μl。

    醋氯酚酸的保留时间约为7min，双氯酚酸钠和未知杂质峰的保留时间分别约为6min和9min；双氯酚酸钠与醋氯酚酸及未知杂质峰间的分离度分别为2.5和 6，理论板数按醋氯酚酸计为5000。色谱图见图1。

    2.2  有关物质

    2.2.1  线性范围  精密称取双氯酚酸钠对照品10mg置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液25ml置100ml量瓶中用流动相稀释至刻度，摇匀。精密量取1.0、2.0、4.0、6.0、8.0ml分别置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液1～5。在上述色谱条件下,分别进样5次，记录色谱图。以浓度X为横坐标,峰面积Y 为纵坐标作标准曲线，计算线性回归方程。结果本品在0.5～4.0μg/ml范围内呈线性关系：Y= 1.99e+004X-3.96e+003，r= 0.9990。

    2.2.2  测定法  精密称取供试品适量（相当于醋氯酚酸50mg）置50ml量瓶中,加甲醇适量振摇使溶解，用流动相稀释至刻度,摇匀，即得供试品溶液。以有关物质线性范围项下浓度2.0μg/ml溶液为对照品溶液。在上述色谱条件下,分别进样5次，调节检测器灵敏度，使对照品溶液主成分峰高度达到满量程的20%，相对标准偏差不得过3.0%。记录供试品溶液色谱图至主成分峰保留时间的2倍，用外标法计算有关物质的含量。见表1。 表1  有关物质测定结果

    2.3  精密度试验  取有关物质测定项下供试品批号（A）溶液，连续5次进样测定,RSD为1.5%。

    2.4  重复性试验  取同一批样品（批号 A）,分别称取5份,按照有关物质测定项下方法操作,RSD为2.91%。

    2.5  稳定性试验  将有关物质测定项下的溶液光照放置3天和9天及30天，按上述色谱条件进行测定，同时新配制对照品溶液。测定结果详见表1。色谱图见图2。

    2.6  响应值测定  在上述色谱条件下,分别取线性范围项下对照溶液1～5 10μl注入液相色谱仪，其主峰的保留时间约为6min，理论板数按醋氯酚酸钠峰计算不得小于4000，重复进样5次，计算每种溶液的平均面积及相对标准偏差值。结果见表2。表2  响应值测定结果

    3  讨论

    本试验采用HPLC法测定醋氯酚酸片中有关物质双氯酚酸钠和未知杂质的含量。该法可有效地将醋氯酚酸与有关物质分离，且分离度好，结果更准确地反映出样品的纯度与质量。

    图2  色谱图

    该样品不是很稳定，对光比较敏感，光照3～30天，有关物质的含量由0.1%增加到65%以上。颜色由无色变为橘黄色。

    测定有关物质的供试品溶液浓度为1mg/ml，从表2可以看出：有关物质的对照溶液的浓度为供试品溶液的0.002倍（0.2%），测定结果的相对标准偏差较小，有较强的可操作性。

    该方法精密度高，重现性好，适用于醋氯酚酸片有关物质测定。

【参考文献】
  1 王槐武,黄励.高效液相色谱法测定醋氯酚酸缓释片的含量.中国现代应用药学,2001,18（1）:53-55.

2 梅之南,雷嘉川.高效液相色谱法测定醋氯酚酸肠溶片的含量.中国药师,2000,5（3）:288-299.

3 王金香,陈碧妍,毕秀玲. 醋氯酚酸杂质的薄层色谱法检测.广东药学院学报,1997,13（2）：127.

4 石宁,秦英.HPLC法测定醋氯酚酸片有关物质影响因素.西北药学杂志,2003,18（6）:247-248.

5 金悠，陈汇，顾世芬，等.反相高效液相色谱法测定人血中的醋氯酚酸.色谱,2004,22（3）：252-254.

6 刘红梅,金锐.高效液相色谱法测定人血中醋氯酚酸的药物浓度.药物分析杂志, 2003,23（5）:328-330.

作者单位：116021 辽宁大连，大连市药品检验所