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【摘要】 目的 探讨S100A4和MMP-9在口腔鳞癌中的表达与临床病理学特征的关系。方法 应用免疫组化SP法检测61例口腔鳞癌和20 例正常口腔组织S100A4和MMP-9的表达情况，分析二者的表达与临床病理特征之间的关系。结果 S100A4蛋白的表达与组织学分级无关（P>0．05），与淋巴结转移呈正相关（P<0．05）；MMP-9的表达与组织学分级及淋巴结转移呈正相关（P＜0．05）。结论 S100A4和MMP-9与口腔鳞癌的侵袭转移密切相关；S100A4和MMP-9的表达与口腔鳞癌的进展密切相关，是判断口腔鳞癌生物学行为、预测转移趋势的有价值的指标。
【关键词】 口腔 鳞状细胞癌 S100A4 基质金属蛋白酶-9 免疫组织化学
The Expression and Clinical Significance of S100A4 and MMP-9 in Oral Squamous Cell Carcinoma
XU Li-qian, GUO Fu-jun.Department of Stomatology, The Hospital of Luoyang North Group, Henan 471031,China
【Abstract】 Objective To investigate the expression of S100A4 and MMP-9 and their roles in the progression of oral squamous cell carcinoma.Methods Immunohistochemistry SP method was used to detect the expression of S100A4 and MMP-9 in tissues from oral squamous cell carcinoma and normal oral tissues.Results The expression of S100A4 had positive correlation with lymph node metastasis （P<0.05）, and no corelation with histological grade （P>0.05）. The expression of MMP-9 had positive correlation with lymph node metastasis and histological grade （P<0.05）.Conclusion S100A4 and MMP-9 are closely related to invasion and metastasis of oral squamous cell carcinoma. The expression of S100A4 and MMP-9 is significantly associated with tumor progression in oral squamous cell carcinoma，which are valuable markers in predicting biological behavior and trend of metastasis in oral squamous cell carcinoma.
【Key words】 oral tumor; squamous cell carcinoma; S100A4; MMP-9; immunohistochemistry
口腔鳞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）的发生和转移与多种癌基因和抑癌基因有关。人类S100A4基因是一种转移相关基因，定位于人染色体1q21，其编码产物S100A4蛋白是Ca2+结合蛋白S100家族的成员。MMP-9 是基质金属蛋白酶家族中的重要成员,主要功能是降解Ⅳ型胶原,而Ⅳ型胶原又是基底膜的主要成分,因而MMP-9 能降解基底膜,基底膜的降解既是肿瘤浸润和转移过程中的关键步骤,同时又是肿瘤血管形成的重要环节,对于肿瘤血管生成、肿瘤细胞的侵袭和转移均具有重要意义。本实验通过免疫组化SP法检测OSCC中S100A4蛋白、MMP-9的表达，并分析表达与临床病理特征之间的关系。
1 材料与方法
1.1 标本 收集2002～2006年医院病理科临床资料完整的存档蜡块81例，口腔鳞癌61例，其中男37例，女24例，年龄27～81岁，中位年龄63岁，另取20例正常口腔组织为正常对照，临床病理资料通过病历记录和组织病理报告获得。
1.2 试剂和方法 S100A4兔多克隆抗体购自Lab Vision公司，工作浓度为1：200；MMP-9兔抗人单克隆抗体、PV - 9000二步法免疫组化检测试剂盒及氨基联苯胺显色试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司，免疫组化染色采用SP法。
1.3 结果判断 S100A4和MMP-9均以细胞浆内出现棕黄色细颗粒为阳性细胞，2人双盲法阅片，每例随机选择10个高倍镜视野共计算1000个细胞，按阳性细胞数占总细胞数的比例计算阳性表达率进行划分：S100A4阳性细胞数≥20％为阳性表达；MMP-9阳性细胞数≥10％为阳性表达。
1.4 统计学处理 采用SPSS13.0统计软件分析，分类资料进行χ2检验，关联性分析计算列联系数，并进行分析。
2 结果
2.1 S100A4、MMP-9的表达 S100A4在口腔鳞癌中的阳性表达率为24.6％（15/61），在正常口腔组织中不表达，差异有显著性（P＜0．05）；MMP-9在口腔鳞癌中的阳性表达率为78.7％（48/61），在正常口腔组织中的阳性表达率为10％（2/20），差异有显著性（P＜0．05）。
2.2 S100A4和MMP-9蛋白表达与临床病理指标的关系 S100A4的表达与年龄、性别、部位、肿瘤分类、组织学分级无关（P＞0．05），有颈淋巴转移的患者S100A4阳性表达率为50.0％（8/16），显著高于无颈淋巴转移的患者15.6％（7／45），差异有显著性（P＜0．05）；MMP-9的表达与年龄、性别、部位、肿瘤分类无关（P＞0．05），与组织学分级呈正相关（P＜0．05），即高分化鳞癌组的阳性表达率显著高于低分化组，有颈淋巴转移的患者MMP-9阳性表达率显著高于无颈淋巴转移的患者，差异有显著性（P＜0．05）。见表1。
2.3 S100A4的表达与MMP-9表达的相关性 在口腔鳞癌中S100A4的表达与MMP-9的表达呈正相关（r＝0.297，P＜0.05）。见表2。
3 讨论
包括S100A在内，S100蛋白家族有21个成员，S100蛋白通过对钙离子的调节及靶蛋白的相互作用,在体内发挥多种生物学功能［1］。S100A蛋白来源于上皮细胞和肿瘤细胞，主要与肿瘤的浸润、转移密切相关［2］。Cho等［3］研究表明S100A4蛋白的过表达与结肠直肠癌的侵袭性密切相关。研究表明，S100A4蛋白可能参与了癌转移通路的多个层面［4］。以共价键二聚体存在于细胞间质中的S100A4蛋白是细胞之间信号传导、细胞与细胞基质相互联系和相互作用的基础，也是肿瘤细胞侵袭和转移的病理表1 S100A4和MMP-9蛋白表达与临床病理表2 S100A4和MMP-9蛋白表达的相关性 基础［2］。Fernandez-Fernandez等［5］推测高水平的S100A4蛋白能促进p53进入到细胞核，因此增加p53对降解的寻靶作用，成为S100A4蛋白能在癌转移中起作用的根本原因。近来研究表明，S100A4基因有可能作为一个评估肾癌病人预后的重要指标［6］。本研究结果显示，S100A4蛋白表达与OSCC的组织学分级无关，与淋巴结转移呈正相关，这提示S1OOA4蛋白的表达与OSCC癌细胞的侵袭、转移密切相关，可作为评估病人预后的重要指标。
肿瘤浸润与转移是一个复杂的过程,细胞外基质的降解被认为是这个过程的重要环节。细胞外基质的降解主要依靠蛋白水解酶。基质金属蛋白酶是蛋白水解酶中较为重要的一类，能降解细胞外基质中多种蛋白成分，在肿瘤细胞突破细胞外基质和血管基底膜的屏障过程中起着重要的促进作用。而其中的MMP-9可特异性地降解其中的Ⅳ型胶原，它是基质降解的关键酶，有利于快速增殖的肿瘤细胞摆脱ECM的束缚而进行迁移，是肿瘤细胞向周围浸润的生化基础［7］。本实验结果显示MMP-9在口腔鳞癌中的阳性表达率（78.7％）明显高于正常口腔组织（10％）。MMP-9以癌巢边缘和散在的癌细胞表达较多，染色较深，提示MMP-9可以破坏靠近肿瘤表面的ECM，使瘤细胞可沿着缺失的BM 向周围组织浸润，促进肿瘤侵袭和转移。高分化鳞癌组的MMP-9阳性表达率显著高于低分化组，有颈淋巴转移的患者MMP-9阳性表达率显著高于无颈淋巴转移的患者，差异有显著性（P＜0．05）。此外，本研究发现S100A4的表达与MMP-9的表达呈正相关（r＝0.297，P＜0．05）。Gap等［8］发现转染反义S100A4基因的神经母细胞瘤，其肿瘤细胞的基质金属蛋白酶（MMP）表达明显下调，而MMP是降解细胞外基质的一个重要的酶，因此笔者认为S100A4可通过上调MMP-9的表达而为肿瘤细胞的转移清除障碍。
总之，S100A4和MMP-9与口腔鳞癌的发生、发展、侵袭和转移有密切的关系，可以作为评估口腔鳞癌病人预后的重要指标。S100A4参与调节MMP-9的表达，可为口腔鳞癌的治疗开辟一条新的途径。
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7 阎庆辉, 王磊, 赵晶, 等. RAB5A﹑基质金属蛋白酶-9在大肠癌中的表达及其关系.中华实验外科杂志,2006,23:805-806.
8 Gap XN，Tang SQ，Zhang KF．S100A4 antisense oligodeoxynueleotide suppresses invaslve potential of neuroblastoma cells．J Pediatr Surg，2005，40（4）：648-652．
作者单位：471031 河南洛阳，洛阳北方企业集团医院口腔科