点击显示 收起
【摘要】 目的 用HPLC法测定止痢宁片中苦参碱的含量。方法 HPLC用外标一点法，Kromasil NH2柱，乙腈- 无水乙醇-3%磷酸溶液（80：10：10）为流动相，流速为1.0ml/min，λ=220nm。结果 苦参碱在0.052125～0.417mg/ml范围内呈良好线性，回归方程为Y=5411430.52X+8349.86，r=0.9997（n=6），平均加样回收率98.0%，RSD为0.72%（n=6）。结论 方法简便、准确，专属性强，测定结果重复性好，为止痢宁片中苦参碱的定量分析提供了科学有效的方法。
【关键词】 止痢宁片；苦参碱；HPLC
【Abstract】 Objective To establish the method for detemining the content of Matrine in Zhilining pian by HPLC.Methods Using Kromasil NH2 Column, Acetonitrile-Ethanol absolute- 3% Phosphoric acid glacial（80∶10∶10） as the mobile phase,detection wavelength as 220nm and flow rate was 1.0ml/min.Results The calibration curve was linear at a range of 0.052125mg/ml ～0.417mg/ml for the Matrine and linear equation was Y=5411430.52X-8349.86 r=0.9997. The average recovery was 98.0% and the related standard deviation（RSD） was 0.72%（n=6）.Conclusion This method was simple and accurate and proper,which can be provide for scientific quantitative analysis method of Matrine in Zhilining Pian and the reduplication of the result was good.
【Key words】 Zhilining Pian；matrine； HPLC
止痢宁片收载于部颁药品标准中药成方制剂第四册中，功能主治：清热祛湿，行气止痛。用于肠炎、痢疾，表现为腹痛泻泄，下痢脓血，肛门灼热，里急后重者［1］。处方由穿心莲、苦参、木香组成，原标准中只有检查项，没有含量控制项。为了更好地控制止痢宁片的质量，提高止痢宁片的质量标准，笔者对止痢宁片处方进行了分析，经过预试验及参考相关资料，进行本品中苦参碱含量测定，并进行了方法学研究，控制药品质量。采用高效液相色谱法测定苦参碱含量，方法简便快速，稳定可靠，专属性强。
1 仪器与试药
1.1 仪器 高效液相谱仪：SPD-10A 日本岛津；紫外分光仪：上海康化生化仪器制造厂；超声波清洗器：SK3200H 上海科导超声仪器有限公司。
1.2 试药 苦参碱对照品（批号110805-200306）由中国生物制品检定所提供；止痢宁片（批号：20070601、20070602、20070603）由河南百年康鑫药业有限公司提供；止痢宁片对照药品（批号：20060501）由江西某药业有限公司生产；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件［2］ 以氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈- 无水乙醇-3%磷酸溶液（80：10：10）为流动相；检测波长为220nm；流速为1ml/min；柱温为室温。理论板数按苦参碱峰计算应不低于2000。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 取苦参碱对照品适量，精密称定，加乙腈-无水乙醇（80：20）溶液，制成每毫升含苦参碱0.20mg的溶液，即得。色谱图见图1。
图1 苦参碱对照品色谱图
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品20片，研细，取0.5g，精密称定，精密加入0.1mol/L盐酸溶液 50ml振摇使溶解，滤过，精密量取续滤液25ml，置分液漏斗中，用三氯甲烷15ml振摇提取1次，弃去三氯甲烷提取液，水层用氨试液调至强碱性，用三氯甲烷提取4次（15、10、10、10ml），合并三氯甲烷液，置水浴上蒸干，残渣用乙醇适量转移至10ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，即得。色谱图见图2。
图2 止痢宁片色谱图
2.2.3 阴性样品的测试 取缺苦参的样品，按供试品制备法制备阴性样品后测定，在苦参碱相应位置无峰出现，说明阴性样品的其他成分无干扰。色谱图见图3。
图3 阴性样品色谱图
2.3 线性关系的考察 精密称苦参碱对照品适量，用乙腈-无水乙醇（80：20）溶液稀释制成不同浓度的对照品溶液，分别为0.052125、0.10425、0.156375、0.2085、0.31275、0.417mg/ml，各进样10μl，测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，苦参碱的浓度为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程Y=5411430.52X+8349.86，r=0.9997（n=6）,表明苦参碱在0.052125～0.417mg/ml之间呈良好的线性关系。
2.4 精密度试验 取浓度为0.2085mg/ml的苦参碱对照品溶液，精密吸取10μl，连续进样6次，测定峰面积，测定结果RSD为1.44%，表明精密度良好。
2.5 重现性试验 取本品20片（批号：20070601），称取总重后研细，分别称取6份，每份0.5g，精密称定，然后按供试品溶液制备方法制备供试品溶液。按照含量测定方法，测定每份样品中苦参碱的含量，结果RSD为1.66%，重现性良好。
2.6 稳定性试验 取本品20片（批号：20070601），研细，称取0.5g，精密称定，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，分别在0、2、4、6、8h测定峰面积，RSD为1.79%（n=5）。表明制备的供试品溶液在8h内稳定。
2.7 加样回收率试验 取本品20片（批号：20070601），称取总重后研细，分别称取6份，每份0.25g，精密称定。分别置之50ml量瓶中，精密加入用0.1mol/L盐酸溶液配制浓度为0.763mg/ml的苦参碱对照品溶液1.0ml，按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液，进样量10μl，测定苦参碱含量，平均回收率为98.0%，RSD为0.72%（n=6）。见表1。表1 加样回收率试验
2.8 样品测定 按照供试品溶液制备方法对3批中试产品进行测定，测定结果见表2。表2 样品测定结果
3 讨论
根据含量测定结果，每片含苦参以苦参碱（C15H24N2O）计，均不少于1.1mg,由于各地苦参药材的差别较大，因此暂规定：本品每片含苦参以苦参碱（C15H24N2O）计，不少于1.0mg。
在止痢宁片处方中，君药为穿心莲，其主要成分为穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯，《中国药典》2005年版一部穿心莲药材就是以此成分控制穿心莲药材质量，为控制止痢宁片质量也拟测定止痢宁片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量来控制产品质量，但在阴性样品试验中，在与穿心莲内酯对照品相应位置出现了严重干扰。
供试品溶液制备方法的考察：为了考察拟定供试品溶液制备方法的合理性，分别取3份样品，精密称定，按供试品溶液处理方法处理，在最后用三氯甲烷萃取时分别萃取3次（15、10、10ml）、4次（15、10、10、10ml）、5次（15、10、10、10、10），测定供试品溶液的含量，结果表明，萃取3次结果偏小，而萃取4次和萃取5次结果区别不大，故采用萃取4次。
【参考文献】
1 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第四册.北京：卫生部药典委员会，1991，35.
2 国家药典委员会.中国药典，2005年版一部.北京：化学工业出版社，2005，141.
作者单位：477150 河南郸城，河南百年康鑫药业有限公司