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【关键词】 单采血浆 丙氨酸氨基转移酶 筛查 微量检测方法
笔者通过对丙氨酸氨基转移酶筛查的微量检测方法进行改进，不仅减小实验误差，降低试剂成本，方便操作，降低劳动强度，而且保证了检测结果判断的准确性，更加适合单采血浆和输血单位对供血浆者（献血者）丙氨酸氨基转移酶筛查。
1 原理
血清中丙氨酸氨基转移酶在一定的反应条件下，作用于丙氨酸及α-酮戊二酸，生成一定量的丙酮酸及谷氨酸。2，4-二硝基苯肼能与反应产生的丙酮酸及剩余的基质α-酮戊二酸生成相应的2，4-二硝基苯腙。后者在碱性条件下呈棕色，从而推算出酶的活力。
2 实验准备
2.1 仪器、设备 雷勃10μl可调移液器；雷勃50μl连续分配器；722型分光光度计；全自动酶标测试仪（北京普朗）；电子微量分析天平（分光度值为0.1mg以下）；电热恒温箱；带盖空白酶标板（江苏海门市博阳实验器材厂生产）。
2.2 试剂 四川迈克生产的丙氨酸氨基转移酶检测试剂。
2.3 操作 用电子微量分析天平精确称取丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒内2mmol/L丙酮酸钠标准液0.438g，加入0.562g蒸馏水配制成0.876mmol/L浓度混匀，密封保存，作为25单位丙氨酸氨基转移酶对照品使用。
2.4 样品测定 按表1顺序分别加入样品、标准试剂进行操作，为减少实验误差，标准孔加3孔，酶标仪取其平均值自动计算。表1 样品微量法测定操作过程
2、4-二硝基苯肼溶液
振荡1min左右混匀，室温静置5～10min，492nm测定波长，630nm参考波长下，空白孔调零进行酶标比色。读取各孔吸光度值A，大于标准孔读数的机器自动打印“+”，表示不合格；小于等于标准孔读数的机器自动打印“-”，表示合格［2］。
2.5 结果判定 被测样本 ：≤25单位为合格，>25单位为不合格。
3 讨论
本实验与已发表文献类似方法不同之处主要有以下几个方面：第一是先加基质，后加样品，目的是为了减少实验误差，因为经过实验证明对20份同样的样品进行检测，先加样品后加基质检测结果的变异系数达到13.2%，而先加基质，后加样品检测结果的变异系数仅有7.8%，原因可能是10μl的样品量太少，容易干燥导致检测结果不准确，基于本检测方法是终点法，作为采浆单位目的是为了筛查出不合格的供血浆者，保证原料血浆的安全性，所以采用先加基质，后加样品的实验步骤；第二是本方法不需要制作标准曲线，因为按照经典的赖氏法对28单位的定义：试管法为50μl 2mmol/L丙酮酸钠标准液，微量法所有试剂均为试管法加样量的1/10，5μl就相当于28单位，经过计算0.876mmol/L丙酮酸钠标准液10μl就相当于微量法的25单位。前提是在25单位到28单位成近似线形［1］。这样判断结果就变得非常简单：OD值比标准孔高的判断为不合格，反之合格。既保留原始打印资料方便今后查找，又节省90%的试剂成本，经过对1125样品用微量法和试管法同时检测，微量法检测结果为小于25单位（OD值为标准孔的0.8～1倍）但是经过试管法确定为大于25单位的有5例，不合格符合率达到99.6%，微量法检测结果为大于25单位（OD值为标准孔的1～1.2倍）但是经过试管法确定为小于25单位的有3例，合格符合率达到99.7%，解决办法是建立灰区范围（标准孔的0.8～1.2倍）用试管法确定。综上所述，该方法更加适合采集原料血浆前的样品筛查。
【参考文献】
1 王日平.赖氏法测定血清ALT/GPT最佳标准曲线选择和计算.国际检验医学杂志,2006,27（6）:封3.
2 边兴国.微量法与试管比色法检测ALT的比较. 微生物学免疫学进展,2004,32（4）:39.
作者单位：四川成都，四川省金堂蓉生单采血浆有限公司检验部