高效液相色谱法测定柴胡颗粒中黄芩苷含量

【摘要】  目的 建立高效液相色谱法测定柴胡颗粒中黄芩苷含量的方法。方法 采用超声法提取柴胡颗粒中黄芩苷,用高效液相色谱法测定其含量。结果 本方法线性方程为: A=-53 503.25+2 417 844.56C（r=0.999）,线性范围10.32～103.2mg/ml,精密度试验:RSD=0.87%（n=5）;平均加样回收率为98.72%。结论 HPLC法可作为柴胡颗粒中黄芩苷含量测定方法,本实验为该产品的质量控制提供了实验依据。

【关键词】  高效液相色谱; 柴胡颗粒; 黄芩苷

柴胡颗粒制剂是由柴胡、姜半夏、黄芩、党参、干草、生姜、大枣等组成的复方制剂,具有解表散热、疏肝和胃功能,用于寒热往来、胸胁苦满、心烦喜吐、口苦咽干等症状。本方中黄芩为君药,其主要成分为黄芩苷, 为了更好地控制该药的生产质量,本文建立了高效液相色谱法测定柴胡颗粒中黄芩苷含量的方法［1］,结果表明,该方法简便,灵敏度高,重现性好。现报告如下。

    1  仪器与试剂

    1.1  仪器  大连依利特高效液相色谱仪,LIV230+紫外-可见检测器,EC2000色谱数据处理系统;AB204-N电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）;CQ-250超声波清洗器（上海必能信超声仪器有限公司）; 0.45μm过滤膜。

    1.2  试剂  黄芩苷标准品（中国药品生物制品检定所）; 柴胡颗粒（昆明云健制药有限公司提供）;甲醇为色谱纯,水为双蒸水,其他试药均为分析纯。

    2  方法与结果

    2.1  色谱条件  色谱柱:Hypersil ODS2柱（5μm, 250mm×4.6 mm）;流动相:甲醇:水:磷酸=47:53:0.2,柱温:25℃;流速:1.0ml/min;进样量10μl;理论踏板数按黄芩苷计不低于3000。在此条件下,黄芩苷能与其他组分达到基线分离。

    2.2  标准品溶液制备  精密称取黄芩苷对照品适量,加70%的甲醇溶解制成每毫升含50μg的溶液。

    2.3  供试品溶液的制备  精密量取柴胡颗粒制剂2.3g（含黄芩苷5mg）,置100ml容量瓶中,加入70%甲醇约50ml,超声30min,静置放冷。用70%甲醇定容至100ml,摇匀,经滤器过滤,取续滤液作为供试品液;另按处方工艺制备不含黄芩的阴性样品,按样品液制备方法制成阴性样品溶液［2］。

    2.4  干扰性试验  分别取黄芩苷对照品溶液、样品溶液和阴性对照溶液，各进样10μl测定。结果表明阴性对照品未呈现与对照品保留时间相同的色谱峰,对测定无干扰。

    2.5  样品含量测定

    2.5.1  线性关系考察  精密称取黄芩苷对照品10.32mg,置100ml容量瓶中,加70%甲醇溶液溶解至刻度,摇匀,分别精密量取1.0、2.0、4.0、6.0、8.0ml置10ml量瓶中加70%甲醇至刻度，摇匀。分别精密量取以上5种浓度溶液10μl注入高效液相色谱仪进行测定。得回归方程：A=-53 503.25+2 417 844.56C（r=0.999）,表明黄芩苷进样量在10.32～103.2mg/ml范围内，峰面积和进样量具有良好的线性关系。

    2.5.2  精密度试验  精密吸取50μg/ml溶液10μl，重复进样5次，测定黄芩苷峰面积，RSD为0.87%,表明仪器的精密度良好。

    2.5.3  稳定性试验  取同一样品溶液10μl，分别于0、1、2、4、6、8、12、24h进样测定，各峰面RSD为1.81%（n=8）。结果表明黄芩苷在24h内稳定。

    2.5.4  重现性试验  取同一样品，按“2.3”项方法操作，重复测定6次，计算黄芩苷的含量为2.17mg/g，RSD为1.62%。表明方法重现性良好。

    2.5.5  加样回收率试验  称取已知含量的柴胡颗粒制剂（含量为2.17mg/g）2.3g,按“2.3”项方法配制样品溶液。分成12分，每4分一组，分别加入黄芩苷标准品适量，计算回收率为98.72%。

    2.5.6  样品含量测定  精密称取6批次柴胡颗粒样品，按“2.3”项方法制备样品溶液，分别进样10μl，按上述色谱条件设定，以峰面积计算黄芩苷含量，其结果依次为：2.23mg/g、2.19mg/g、2.26mg/g、2.13mg/g、2.15mg/g、2.17 mg/g。

    3  讨论

    3.1  供试品溶液的制备  有研究曾采用以碱水提取,酸化后以乙酸乙酯萃取,挥干溶剂,加定量甲醇溶解后进样的方法进行测定,但处理过程繁琐。柴胡颗粒的主辅料为蔗糖,以甲醇为溶剂,经超声法提取,提取液颜色较浅,经滤过后可直接进样。

    3.2  测量方法的选择  中成药中黄芩苷的测定方法很多,如分光光度法、薄层扫描法、二阶导数光谱法等。高效液相色谱法以其速度快、方法简便、准确性高、重现性好、分离效果好等优点,更适合制剂中黄芩苷含量测定。

    3.3  流动相的选择  不同文献对多种类型和不同比例的流动相进行了反复的实验比较，结果表明：以甲醇:水:磷酸=45:55:0.2为流动相，保留时间长，柱效较高，分离效果佳。

【参考文献】
  1 王凯祥,陈圆晰.高效液相色谱法测定小柴胡冲剂中黄芩昔含量.中国现代应用药学,1999,16（2）:47.

2 王薇,覃贝.高效液相色谱法测定芩连颗粒中黄芩苷的含量.中国药物与临床,2008,8:662-663.

作者单位：辽宁阜新，阜新市卫生学校 辽宁沈阳，中国医科大学