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【摘要】 目的 采用荧光光度法测定加替沙星的含量。方法 在pH6.0的Britton-Robinson（B-R）缓冲溶液中，刚果红能与钙黄绿素生成配合物，使钙黄绿素荧光猝灭，加入加替沙星后，加替沙星与刚果红可生成比钙黄绿素-刚果红更稳定的配合物，使钙黄绿素游离重现荧光。结果 将该方用于片剂、粉针剂和尿液中加替沙星的测定，结果与文献报道的紫外法一致。结论 所用方法简单、快速、准确、灵敏。
【关键词】 钙黄绿素；刚果红；加替沙星
Fluorometry determination of gatifloxacin with calcein-congo red
ZHANG Lei, DONG Xue-zhi, HU Wei-ping,et al. Pollution Control Institute, College of Chemistry and Chemical Engineering ,Henan University，Henan 475004, China
【Abstract】 Objective To establish a method for determination of gatifloxacin by fluorometry.Methods The complex between congo red（CR）and calcein in pH 6.0 Britton-Robinson （B-R） buffer solution quenched fluorescence of calcein. The complex of gatifloxacin-CR was more stable than that of calcein-CR.When gatifloxacin was added into system, the calcein could be freed and its fluorescence appeared again.Results This method had been applied to the determination of gatifloxacin in tablet, injection and urine, and the results were very close to those obtained by using UV method that reported.Conclusion This method is simple, rapid,accurate and sensitive.
【Key words】 calcein; congo red;gatifloxacin
加替沙星（gatifloxacin,AM-1155,GFLX）是新的第四代喹诺酮类抗生素药物，具有抗菌谱广，抗菌活性强的特点。它对革兰阳性菌、革兰阴性菌、厌氧菌及衣原体均具有强大的抗菌作用［1］。加替沙星的测定方法有高效液相色谱法、荧光光度法、反相离子对色谱法、高效毛细管电泳法和紫外分光光度法［2～6］等。但利用钙黄绿素-刚果红荧光体系来测定加替沙星含量还未见报道。本文经研究发现刚果红能与钙黄绿素生成没有荧光的配合物，使钙黄绿素荧光猝灭，加入加替沙星后，加替沙星与刚果红反应生成比钙黄绿素-刚果红更稳定的配合物，游离出钙黄绿素，释放出荧光。以此为基础，建立了测定加替沙星的新方法。
1 实验与方法
1.1 仪器与试剂 pHS-3CT型酸度计（上海大中仪器有限公司）；970CRT型荧光分光光度计（上海精密仪器厂）；Labtech-1000紫外-可见分光光度计（北京莱伯泰科仪器有限公司）。
加替沙星片（通化金马药业集团股份有限公司，批号：20080201，每片0.1g）；沙星粉针剂（浙江亚太药业股份有限公司，批号：070201，每安瓿0.2g）。
加替沙星对照品（GFLX，0.2g/L，河南省药检所提供）溶液：准确称取0.0200g GFLX，加水溶解后定量转移到100ml容量瓶中，用水定容，用时逐级稀释。钙黄绿素（1×10-4mol/L）：准确称取0.0175g 钙黄绿素，加少量水溶解后配制成溶液250ml。刚果红（CR 1×10-4mol/L）准确称取0.6967gCR，加少量水溶解后配制成溶液1000ml。B-R缓冲溶液：取浓度均为0.04mol/L的硼酸，磷酸，醋酸混合溶液，用0.20mol/L的NaOH调至所需pH值。所用试剂均为分析纯，水为二次重蒸水。
1.2 实验方法 在10ml容量瓶中依次加入1.5ml B-R缓冲溶液（pH6.0）、0.5ml钙黄绿素溶液、5ml CR溶液和适量GFLX溶液，用水稀释至刻度，摇匀。在λex/λem=492nm/514nm，470～540nm之间进行荧光同步扫描。
2 结果与讨论
2.1 体系的荧光特性 在pH 6.0的B-R缓冲溶液中按实验方法对钙黄绿素、钙黄绿素-CR、钙黄绿素-CR -GFLX体系进行荧光扫描，由图1可知钙黄绿素在500nm处有强烈荧光，加入刚果红后荧光猝灭，再加入加替沙星，荧光强度增强。
2.2 酸度的影响 试验不同酸度的B-R缓冲溶液对体系的影响（见图2）。实验表明：pH为6.0时，钙黄绿素和钙黄绿素-CR的荧光最强，并且猝灭程度最大，因此选择pH6.0的B-R缓冲溶液。
2.3 缓冲溶液用量的影响 试验B-R缓冲溶液（pH6.0）不同用量时对体系的影响（见图3）。实验表明：用量为1.5ml时，体系的荧光强度最强，且猝灭程度最大，因此选择pH6.0的B-R缓冲溶液1.5ml。
2.4 CR用量的影响 试验CR不同用量时对体系的影响（见图4）。实验表明：随着CR的逐渐增加，荧光强度逐渐降低，当用量大于4.5ml时，体系达到稳定，因此选择CR溶液5.0ml。
2.5 时间的影响 考察了2h内时间对体系的影响（见图5）。实验表明：反应在常温下很快完成，且在2h内保持稳定。
2.6 干扰试验 对药品辅料和尿液中常见的物质以及金属离子进行了试验。实验表明：在误差±5% 范围内，500倍的葡萄糖、糊精、可溶性淀粉、尿素、NH+4、Na+ 和K+不干扰测定；5倍的Mg2+、Zn2+和Fe3+不干扰测定。
2.7 标准曲线与检出限 按实验方法，在10ml容量瓶中依次加入1.5ml B-R缓冲溶液（pH=6.0）、0.5ml钙黄绿素溶液、5ml CR溶液和适量GFLX对照品溶液，用水稀释至刻度，摇匀，以质量浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标绘制工作曲线（见图6）。实验表明：加替沙星质量浓度在2.0～8.0mg/L范围内与荧光强度呈良好的线性关系，其线性回归方程为：Y=42.066+5.6866Ｃ（r=0.9991），检出限为0.051mg/L。
3 样品的测定
3.1 片剂中GTFX的测定 取加替沙星样品10片，研磨均匀，精密称取0.177g（相当于加替沙星0.1g）加水溶解后定量转移置1000ml容量瓶中，用蒸馏水定容，干过滤，弃去初滤液，收集续滤液得样品溶液。按实验方法，用工作曲线法进行测定，用文献［6］的紫外分光光度法做对照实验，测定结果见表1。
3.2 粉针剂中GTFX的测定 精密称取0.143g（相当于加替沙星0.1g）粉针剂，加水溶解后置1000ml容量瓶中，用蒸馏水定容，干过滤，弃去初滤液，收集续滤液得样品溶液。按实验方法，用工作曲线法进行测定，用文献［6］的紫外分光光度法做对照实验，测定结果见表1。表1 片剂和粉针剂中加替沙星的测定结果
3.3 尿液中GTFX的测定 取10ml加替沙星对照品溶液于100ml容量瓶中，用尿液定容，制成人工合成尿样。准确量取尿样溶液1ml于10ml容量瓶中，用甲醇定容后在离心机中离心5min（5500r/min），取上清液用工作曲线法进行测定， 用文献［6］的紫外分光光度法做对照实验，测定结果见表2。
3.4 回收率试验 在样品溶液中加入适量的加替沙星对照品溶液，按实验方法进行回收率试验（见表3）。 表2 尿液中加替沙星的测定结果 表3 方法回收率试验
【参考文献】
1 许铁男.新喹诺酮类抗菌剂AM1155.国外医药·抗生素分册,1998,19（4）:302.
2 邓立东,程强,徐勤.高效液相法测定加替沙星尿药浓度.右江民族医学院报,2002,24（3）:344-345.
3 连宁,孙春燕,赵慧春.加替沙星的荧光光度法测定.分析测试学报,2002,21（1）:79-81.
4 徐晓卫,张崇生,潘柔和.反相离子对色谱法测定甲磺酸加替沙星注射剂的含量.安徽医药,2006,10（7）:505-506.
5 朱斌,姜受军,胡昌勤.高效毛细管电泳法测定加替沙星含量.药物分析杂志,2002,22（5）:397-400.
6 秦雪莲,徐勤,邓立东.紫外分光光度法测定加替沙星片的含量.西北药学杂志,2004,19（4）:154-155.
作者单位：河南开封，河南大学化学化工学院污控研究所