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【摘要】 目的 建立康艾注射液中黄芪甲苷的含量HPLC-ELSD法测定。方法 采用高效液相色谱法，以蒸发光散射检测器检测，采用外标二点法对数方程计算含量。色谱柱：SHIMADZU VP-ODS（4.6mm×250mm）；流动相：乙腈-水（35：65）；流速：1.0ml／min；柱温：30℃；ELSD参数：雾化器温度55℃,漂移管温度90℃，氮气气压0.75MPa,气体流速为1.15L/min。结果 在色谱图中黄芪甲苷与其他色谱峰完全分离。黄芪甲苷在进样量为0.64～3.20μg时有良好的线性关系Y = 1.412X+9.0692（r=0.9999），平均回收率为95.00％，RSD为0.91％。结论 HPLC-ELSD法具有准确、简便、无干扰而且重现性好的优点，适合用于康艾注射液中黄芪甲苷含量的测定。
【关键词】 康艾注射液；黄芪甲苷；HPLC-ELSD
【Abstract】 Objective To establish a method for determination the content of astrogloside IV in Kang’ai injection.Methods To determine the quantity by ELSD-HPLC and calculate the contents with two-point external standard method and logarithmic equation. Shimadzu VP-ODS column（250mm×4.6mm） was used with a mobile phase of acetonitrile-water（35:65）and the flow rate at 1.0mL/min.ELSD was used with the drift tube temperature of 90℃ and the gas flow rate at 1.15L/min．Results The chromatographic peak of astrogloside IV was separated completely. The linear range of astrogloside IV was 0.64～3.2ug（r=0.9999，and the average recovery was 98.80% with RSD=0.91%.Conclusion The method is effective for the quality control of Kang’ai injection．
【Key words】 Kang’ai injection;astrogloside Ⅳ;HPLC-ELSD
康艾注射液能够益气扶正，增强机体免疫功能。可用于原发性肝癌、肺癌、直肠癌、恶性淋巴瘤、妇科恶性肿瘤，各种原因引起的白细胞低下及减少症，慢性乙型肝炎，是收载于国家药品中药标准的品种［1］，由黄芪、人参和苦参素三味中药组成。未见有黄芪成分黄芪甲苷的含量测定报道，本文采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法，对黄芪中黄芪甲苷进行了定量分析，结果表明本研究建立的方法有操作简便，重现性好，可作为康艾注射液中黄芪甲苷的检测方法。
1 仪器与试剂
1.1 仪器 GR-202电子分析天平：日本；岛津LC-2010A HT高效液相色谱仪；N2010色谱工作站； PL-ELS2100。
1.2 试剂 康艾注射液：长白山制药股份有限公司，批号650151；黄芪甲苷对照品：批号110781，供含量测定用，购于中国药品生物制品检定所；乙腈为色谱纯（厂家：FisherScientific,批号：070602）；水为重蒸馏水。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：岛津VP-ODS柱（4.6mm×250mm）；流动相：乙腈-水（35：65）；流速：1.0ml／min；柱温：30℃；进样量：10μl；ELSD参数：雾化器温度55℃,漂移管温度90℃，氮气气压0.75MPa，气体流量为1.15L/min。
2.2 对照品溶液制备 精密称取黄芪甲苷对照品4.17mg置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.417mg／ml的贮备液。
2.3 样品溶液制备 精密量取康艾注射液10ml置125ml的分液漏斗中，加水20ml，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml,合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至5ml容量瓶中，摇匀,用微孔滤膜（0．22μm）滤过，即得供试品溶液。
2.4 阴性对照品的制备 取缺黄芪的阴性样品10ml，按供试品制备阴性对照品溶液。
按上述方法测定，结果阴性对照样品在黄芪甲苷峰位置无吸收峰，表明处方中的其他成分对本品含量测定无阴性干扰。见图1。
图1 阴性对照品的制备
Fig1 HPLC chromatrogram of A （Astrogloside IV） B（sample） C（negtive sample）2.5 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液（0.160mg／m1）4、5、10、15、20μl，按“2.1”项下的色谱条件分别注入液相色谱仪测定其峰面积，以进样量的对数为横坐标，以黄芪甲苷峰面积的对数为纵坐标，得线性回归方程为Y = 1.412X+9.0692,r=0.9999，结果表明黄芪甲苷在0.64～3.20μg范围内其对数值与峰面积的对数值呈良好的线性关系。
2.6 精密度试验 精密吸取黄芪甲苷对照品溶液10μl连续进样5次，按“2.1”项下色谱条件测定黄芪甲苷峰面积。求得黄芪甲苷峰面积对数平均值为：5.52，结果RSD为0.10%，说明仪器精密度良好。
2.7 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液（批号650151）10μl，在室温下，在2、4、8、12h进样测定，以外标两点法对数黄芪甲苷峰面积值，求得黄芪甲苷峰面积对数平均值为5.21；相对标准偏差RSD分别为0.32％，结果表明黄芪甲苷在12h内稳定性良好。
2.8 重复性试验 取同一供试品溶液（批号650151），平行取样6份，按样品溶液制备方法“2.2”项下操作并检测。结果黄芪甲苷平均含量为0.10mg/ml，RSD为1.85%，表明方法重复性良好。
2.9 回收率试验 精密量取已知含量的康艾注射液（批号650151，含量为0.1mg/ml）5ml 6份，分别精密加入黄芪甲苷对照品1ml（浓度为0.485mg／ml），按供试品溶液制备方法操作，进样10μl，测定黄芪甲苷的含量，结果见表1。结果样品的平均回收率为98.80%，RSD为0.91% 。说明该方法稳定可控。见表1。表1 加样回收率试验结果
2.10 样品测定 取不同批号的样品3批,按“2.1、2.2、2.3”项下色谱条件及对照品和供试品溶液的制备方法检测，并计算黄芪甲苷的含量，结果见表2。表2 样品测定结果
3 讨论
3.1 检测器的选择 黄芪甲苷的含量测定法有薄层扫描法，紫外检测的HPLC法及HPLC-ELSD法，参照《中国药典》2005年版一部“黄芪”项下的［含量测定］［2］使用蒸发光散射检测器检测黄芪甲苷，故本文也选择蒸发光散射检测器对黄芪甲苷进行检测。
3.2 提取次数的选择 精密量取同一批样品（批号650151）10ml 3份。按“2.2”项下方法制备样品溶液，分别用水饱和正丁醇提取2、3、4次后，测定，黄芪甲苷的含量分别为0.09、0.10、0.10mg/ml。结果表明，提取3次和4次的含量均比2次高，提取3次和4次的含量是相同的,故以3次作为供试品提取次数。
经上述考察，采用高效液相-蒸发光散射法测定康艾注射液中黄芪甲苷含量的方法准确可靠，可用于该药的质量控制。
【参考文献】
1 国家药品监督管理局. 国家药品中药标准.内科（肺系）一分册:91.
2 国家药典委员会.中华人民共和国药典.北京:化学工业出版社,2005,212.
（编辑：齐 永）
作者单位：1 543002 广西梧州，梧州食品药品检验所 2 广西桂林，桂林医学院（2004级药学本科实习生）