高效液相法测定骨刺消痛胶囊中龙胆苦苷的含量

【摘要】  目的 用高效液相色谱法测定骨刺消痛胶囊中龙胆苦苷的含量。方法 采用ODS C18柱（5μm,4.6mm×250mm），流动相：甲醇-水（35：65），检测波长：254nm，流速：1.0ml/min，柱温：室温。结果 龙胆苦苷在0.312～2.080μg范围内线性关系良好（r = 0.9993），方法的回收率为98.12%，RSD为1.17%（n=5）。结论 该方法能准确可靠地进行含量测定，能够有效地控制该制剂的含量。

【关键词】  骨刺消痛胶囊；龙胆苦苷；高效液相色谱法；含量测定

    【Abstract】  Objective  To establish a method for determinating gentiopicroside in  Guci Xiaotong capsules by HPLC.Methods  Kromasil C18 column（250×4.6mm,5μm）  was used with methyl alcohol-water（35：65）as the mobil phase .The flow rate was1.0ml/min,detection wavelength was 254nm,and the column temperature was room temperature.Results  The linear range of gentiopicroside was 0.312～2.08μg （r = 0.9993）. The average recovery was 98.12% with RSD 1.17% （n=5） .Conclusion  The method is rapid,accurate and reliable, and can be used to control the quality of Guci Xiaotong capsules.

    【Key words】  Guci Xiaotong capsules；gentiopicroside；HPLC；determination

    骨刺消痛胶囊为原部颁标准收载（WS3-B-3944-98）品种，是由制川乌、秦艽、甘草、天南星、徐长卿等药材经过提取制备成的胶囊剂，具有祛风止痛之功，主要用于骨质增生、风湿性关节炎、风湿痛。原部版标准中无含量测定项目，在对其进行了丹皮酚含量测定的基础上，对处方中秦艽所含的有效成分龙胆苦苷也进行了含量测定研究，药理研究提示龙胆苦苷能减轻二甲苯所致小鼠耳肿胀、冰醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增加、角叉菜胶、酵母多糖A所致大鼠足跖肿胀，表明秦艽所含龙胆苦苷具有一定的抗炎作用，能部分代表秦艽生药的传统功效，因此含量控制很有必要。龙胆苦苷的含量测定方法，文献报道主要采用薄层扫描法［1］和高效液相色谱法［2］，笔者采用液相色谱法对制剂中龙胆苦苷进行了测定研究，并制定出合理的含量限度。经过方法学考察及三批样品测定，测定方法在提取完全性、重现性、精密度良好，回收率符合要求，整个试验过程可操作性强，能够客观地控制本品的含量。现报告如下。

    1  仪器与试药

    1.1  仪器  Waters 600E液相色谱仪；Waters 600泵，Waters 2487紫外检测器；millog色谱工作站。

    1.2  试剂与试药  龙胆苦苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：770-200106），水为重蒸馏水，甲醇为色谱纯，骨刺消痛胶囊（陕西中医学院药物研究所自制）。

　　2  方法与结果

    2.1  色谱条件与系统适用性  色谱柱为Kromosil ODS C18（5μm，4.0mm×250mm），流动相：甲醇-水（35:65），检测波长：254nm，流速：1ml/min，柱温：室温。在此条件下，样品中龙胆苦苷得到良好分离，峰型窄而对称，理论板数为5045，而缺秦艽阴性样品在对应吸收峰处无干扰。

    2.2  标准曲线与线性范围  精密称取龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制备成每1ml含0.104mg的溶液，作为对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液3、5、10、15、20μl，按上述色谱条件，注入液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积积分值（X）为纵坐标，进样量（Y）为横坐标绘制标准曲线，以峰面积对进样量（μg）回归，得回归方程Y =954077.6455X-1115.16，r=0.9993，结果表明，龙胆苦苷在0.312～2.08μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

    2.3  精密度试验  精密吸取供试品溶液（批号：030401）溶液10μl，连续进样5次，记录峰面积，结果面积的RSD=1.79%，结果表明，本方法精密度良好。

    2.4  重复性试验  取本品（批号：030401）5份，依供试品制备方法制备供试品，依法测定含量，结果5份样品的含量（mg/粒）分别为0.61、0.61、0.59、0.58、0.62，平均含量为0.60mg/粒 ，RSD=2.73%，结果表明，本方法重复性良好。

    2.5  稳定性试验  取样品（批号：030401），按供试品制备方法制备供试品，分别于0、4、8h测定峰面积，结果峰面积分别为889775、878103、882487，峰面积的RSD=0.67%，结果表明，本品在8h内稳定性良好。

    2.6  回收率试验  采取加样回收法，取一定量已知含量的样品（批号：030401，C=0.60mg/粒），加适量对照品，依法制备成供试品溶液，测定含量，计算回收率，结果见表1。结果表明，本方法回收率良好。表1  回收率试验结果

    2.7  样品测定  取本品内容物3g，精密称定，置于三角瓶中，加50ml甲醇，称定重量，超声提取40min，用甲醇补充减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。按前述色谱条件测定，结果见表2。表2  骨刺消痛胶囊含量测定结果

    经过三批含量测定结果及整个含量测定研究过程，考虑到秦艽药材中龙胆苦苷的含量及制备工艺中的其他影响因素，暂定本品含秦艽以龙胆苦苷（C16H20O9）计，每粒不得少于0.40mg。

　　3  讨论

    骨刺消痛胶囊部颁标准中无含量测定项目，笔者先期对处方中徐长卿所含有的丹皮酚进行了含量研究，但考虑到秦艽中含有龙胆苦苷对本品的功能主治具有一定的支持，因此对其也进行了含量研究，更具有含量控制意义。

    龙胆苦苷含量测定方法文献报道较多，高效液相色谱法条件也较为成熟，采用文中方法能够达到快速有效分离，保留时间约为7min。

    在供试品制备过程中，比较了加热回流和超声处理的方法，结果回收率均符合要求，但加热回流所得供试品的颜色较深，且色谱峰显示杂质峰过大，不利于色谱柱的保护，因此最终采用超声处理。

【参考文献】
  1 钟强，谢娇，潘洪. 双波长薄层扫描法测定泻胆丸中龙胆苦苷的含量. 时珍国医国药，2004，15（7）：393.

2 许江红,陈华敏,张美雯. HPLC法测定排石利胆颗粒中龙胆苦苷的含量.中国药事,2007，21（12）：998-999.

作者单位：1 710021 陕西西安，西安医学院药学系 2 712046 陕西咸阳，陕西中医学院