桂枝挥发油对三七总皂苷透皮吸收的影响

【摘要】  采用离体裸鼠皮肤，以人参皂苷Rg1为指标，应用Valia-Chien水平扩散池和HPLC检测法，考察桂枝挥发油对三七总皂苷透皮吸收的影响。结果：单纯的三七总皂苷难以透过裸鼠离体皮肤，1%、3%浓度桂枝挥发油对三七总皂苷的透皮吸收均有促进作用。

【关键词】  桂枝挥发油；三七总皂苷；透皮吸收；人参皂苷Rg1

Effect of volatile oil of Ramulus Cinnamoni on percutaneous absorption of Panax notoginseng  saponins

    DAI Zi-qi,CHEN Zhou-quan, CHEN Hong-ying. Maternity and Child Care Hospital of Hunan Province , Changsha 410008,China

    【Abstract】  The effect of volatile oil of Ramulus Cinnamoni on percutaneous absorption of Panax notoginseng saponins （PNS） was studied on the skin of isolated nude mice, with ginsenoside Rg1 as the index, HPLC methodand Valia-Chien horizontal diffusion cell were used. The result indicated that it was not easy for PNS alone to penetrating the skin of isolated nude mice, but 1% and 3% volatile oil of Ramulus Cinnamoni possessed the promoting action on percutaneous absorption of PNS.

    【Key words】  volatile oil of Ramulus Cinnamoni; Panax notoginseng saponins; percutaneous absorption;ginsenoside Rg1

    痛风是由嘌呤代谢紊乱所致的全身性疾病，以高尿酸血症伴痛风性急性关节炎为其临床特征。反复发作可产生痛风石沉积、关节畸形和肾结石［1］。随着生活水平的提高，近年来该病的发病率也呈上升趋势。对于痛风的治疗，目前尚无特效的方法，西医一些常规的治疗药物不但效果不理想，而且还存在不同程度的毒副作用，限制了其临床应用。近年来，采用中医药治疗本病疗效较好，尤其是中药外敷治疗痛风，安全有效，更受患者欢迎，如慈军散［2］（由山慈姑、生大黄、水蛭等组方）。

    笔者根据中医对现代医学痛风的认识［3］以及结合目前中医临床对痛风的治疗经验，选用具有解毒散结、消肿止痛功效的山慈姑，具有活血、通络、止痛功效的三七，具有温阳通脉、助阳化气、利关节、除痹痛作用的桂枝等组成痛风方，拟开发用以防治痛风的中药外用贴剂，用以外贴治疗痛风急性发作或预防痛风。本研究以人参皂苷Rg1为指标，考察痛风方桂枝挥发油对三七总皂苷透皮吸收的影响。

    1  材料、仪器与试剂

    1.1  动物  裸鼠，♂，8周龄（购于上海肿瘤研究所实验动物中心）。

    1.2  试药  三七（上海市徐汇区饮片厂），桂枝（上海市徐汇区饮片厂），桂枝挥发油（自制），三七总皂苷（自制），人参皂苷Rg1（中国药品生物制品鉴定所）。

    1.3  仪器  HP1100高效液相色谱仪（美国惠普公司），HP8453可见-紫外分光光度仪（美国惠普公司，旋转蒸发器RE-52（上海青浦沪西仪器厂），81-2型恒温磁力搅拌器（上海司乐仪器厂），超级恒温仪（上海实验仪器总厂），Valia-Chien水平扩散池（中科院上海有机化学研究所）。

    1.4  试剂  乙腈（色谱纯），磷酸（分析纯）。

　　2  方法

    2.1  试验样品的制备

    2.1.1  桂枝挥发油的制备  将桂枝粉碎成粗粉，加12倍量蒸馏水浸泡2h，水蒸气蒸馏法提取8h，采用适当方法将油水分离后，测量挥发油体积，计算提取率（ml/g）：0.52%±0.002%。

    2.1.2  三七总皂苷的制备  称取三七药粉（20～40目），用70%乙醇适量闷润3h，装入渗漉桶，浸泡48h，以20倍溶剂量，2ml/min速度进行渗漉，收集渗漉液，减压回收乙醇并将乙醇除尽，得粗提取物，将粗提物用适量蒸馏水溶解并过滤，滤液过D101大孔吸附树脂层析柱，先用蒸馏水处理至无糖反应（Molish反应），再用5%-10%-20%-30%-50%-70%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇至干燥，得三七总皂苷提取物，得膏率为12.49%±0.49%，三七总皂苷提取率为92.11%±3.84%，总皂苷含量为75.21%±1.72%（n=3）。

    2.1.3  体外透皮实验用供试品溶液的制备  称取三七总皂苷提取物适量，加蒸馏水制成浓度为92.04mg/ml（以总提取物计）的三七提取物溶液；取部分溶液分别加入1%、3%（ml/ml）桂枝挥发油，超声处理30min，得含1%、3%（ml/ml）桂枝挥发油浓度为92.04mg/ml三七提取物的乳浊液。

    2.2  体外透皮试验方法  取裸鼠断颈处死，小心分离剑突下皮肤，剔除皮下组织和脂肪，每张鼠皮分成4小块，将其固定于Valia-Chien水平扩散池中间，使角质层面向供给池，供给池中加入以上已预热至32℃±0.5℃的供试品溶液各5ml（n=4），接受池为预热至32℃±0.5℃的蒸馏水5ml，扩散池恒温夹层套内循环水温度为32℃±0.5℃，搅拌子放入扩散池中，恒速磁力搅拌。加样平衡15min后开始计时，分别于12、14.5、17、19.5、22、24.5h取样，每次取样0.2ml，同时补充同量接受液，样品液用HPLC法测定其人参皂苷Rg1的浓度，经校正后，计算累积渗透量（g/ml，以人参皂苷Rg1计），对时间进行回归，得渗透方程，计算其渗透速率。

    2.3  人参皂苷Rg1HPLC分析测试方法［4］

    2.3.1  色谱条件  色谱柱：Hypersil ODS2柱，检测波长：203nm，流动相：乙腈∶0.05%磷酸溶液（11∶40），流速：1.0ml/min，柱温：室温。

    2.3.2  标准曲线的建立  精密称取人参皂苷Rg1对照品11.80mg，用甲醇定容于5ml的容量瓶中，得浓度为1.18mg/ml的对照品溶液，以此溶液为基准，依次配制浓度为0.59、0.295、0.118、0.059mg/ml的对照品溶液，取上述溶液各10μl进样测定，计算峰面积，以峰面积（A）为纵坐标，对照品溶液浓度（C）为横坐标进行回归，得回归标准曲线为：A=1595.18C-15.89，r=0.9998。进行样品测定时，依照两点校正法，用外标峰面积计算样品含量。

    2.3.3  精密度试验  将浓度为0.59mg/ml的对照品溶液连续进样6次，测定峰面积，分别为：847.4、860.4、872.2、847.3、852.5、853.9，RSD=1.11%。

    2.3.4  回收率试验  在24.5h空白皮肤透过液中精密加入一定量的人参皂苷Rg1对照品，测定其浓度，计算回收率，结果：回收率为100.3%，RSD为1.92%（n=6）。

　　3  结果

    以浓度为92.04mg/ml（以总提取物计）的三七提取物溶液，含1%、3%（ml/ml）桂枝挥发油浓度为92.04mg/ml三七提取物的乳浊液为研究对象，以人参皂苷Rg1为指标，考察三七总皂苷体外透皮吸收情况，结果见表1、表2。

    由表1、表2可知，单纯的三七总皂苷提取物难以透过裸鼠皮肤，而同桂枝挥发油制备成乳浊液后，三七总皂苷提取物中人参皂苷Rg1能够较好的透过裸鼠皮肤，提示桂枝挥发油对三七总皂苷提取物的透皮吸收有较好的促渗作用。桂枝挥发油浓度高低对三七总皂苷提取物的渗透速率影响不大，但对其渗透时滞影响较明显。

    4  讨论

    中药挥发油一般气味芳香，性善走窜，能行能散，通常具有较强的穿透性。本实验研究表明，痛风方中的药味桂枝所含的挥发油对方中另一药味三七所含的药效成分具有明显的促进渗透作用，从一定程度说明了本组方的可行性、合理性，提示对中药透皮制剂而言，可以从处方药味本身挖掘具有促渗作用的药效成分，这样不仅有利于发挥药物本身的作用，也有利于其他药物成分的渗透和制剂处方药效作用的协同发挥。但由于中药所含成分的复杂性，单一成分还不能完全表达药材本身的透皮特性，对于中药透皮制剂的研究，应该针对中药本身发挥治疗作用的特点，建立更全面的评价方法。 表1  三七提取物的体外经皮渗透试验结果表2  三七提取物的体外经皮渗透的动力学方程

【参考文献】
  1 邵循道.西氏内科学.西安：世界图书出版西安公司,1995，760.

2 栾炯，孟粉照. 慈军散外敷治疗痛风36例临床观察.山西中医，1997，13（3）：44.

3 王文莉，孙启放.90年代痛风的中医治疗概况.中医药研究，1995，（5）：58.

4 国家药典委员会.中华人民共和国药典,2000版.北京：化学工业出版社，2000，一部：6-7.

作者单位：410008 湖南长沙，湖南省妇幼保健院 广东深圳，三九医院股份有限公司