HPLC法测定大败毒胶囊中芍药苷的含量

【摘要】  目的 建立HPLC法测定大败毒胶囊中芍药苷的含量。方法 用C18色谱柱（DiamonsilTM 4.6mm×200mm，5μm），柱温为30℃，流动相为乙腈-水-磷酸（14：86：0.1），流速为1.0ml/min，检测波长为230nm。结果 此方法芍药苷在0.09810～1.962μg范围内与峰面积线性关系好，ｒ=0.9997，平均回收率为99.7%，RSD为0.5%（n=6）。结论 本法测定简便，结果准确，重复性和分离度好，可用于大败毒胶囊的质量控制。

【关键词】  HPLC；芍药苷；大败毒胶囊；含量测定

【Abstract】  Objective  To establish a HPLC method for determination of paeoniflorin in Dabaidu capsule. Methods   A C18 column （DiamonsilTM 4.6mm×200mm）,column temperature of 30℃,a mobile phase composed of acetonitrile-water - phosphoric acid （14：86：0.1） were adopted. Wave length: 230nm. Flow rate: 1.00ml/min. Results  The linear range was at 0.09810μg ～1.962μg, r= 0.9997.The recovery of paeoniflorin was99.7% with RSD=0.5%（n=6）.Conclusion  The determination method is simple and rapid by HPLC ,paeoniflorin in this product can be controlled.

    【Key words】  HPLC;paeoniflorin; dabaidu capsule; determination

    大败毒胶囊为《卫生部药品标准中药成方制剂》第十二册收载的品种［1］，由大黄、蒲公英、赤芍、陈皮、黄柏等17味中药组成，具有清血败毒、消肿止痛等功效。用于治疗脏腑毒热、血液不清引起的梅毒、血淋、白浊、尿道刺痛、大便秘结、疥疮等症。原标准中无含量测定方法，方中赤芍为主要药味之一,其有效成分为芍药苷。有关芍药苷的含量测定方法，主要为HPLC法［2，3］。为能有效地控制药品质量，本试验采用HPLC法测定芍药苷的含量，建立质量控制标准。

    1  仪器与试药

    Shimadzu HPLC色谱仪（Shimadzu LC-20A Liquid Chromatograph, Shimadzu SIL-20A Auto Sampler, Shimadzu SPD-M20A Diode Array Detector, Shimadzu CTO-10AS VP Column Oven）LC Solution 色谱工作站。水为Ⅰ级纯化水，乙腈为色谱纯，其他均为分析纯。

    芍药苷对照品购自中国药品生物制品检定所（批号：110736-200732，含量98.1%）；大败毒胶囊（西安天一制药有限责任公司，批号070101，吉林巨仁堂药业股份有限公司，批号:080501）。

    2  试验方法与结果

    2.1  色谱条件  色谱柱： C18 柱（DiamonsilTM 4.6mm×200mm，5μm），柱温：30℃，流动相：乙腈-水-磷酸（14：86：0.1），流速：1.0ml/min，检测波长：230nm。

    2.2  溶液的制备

    2.2.1  对照品溶液的制备  精密称取芍药苷对照品10.00mg，加甲醇制成每1ml含芍药苷49.05μg的溶液，备用。

    2.2.2  供试品溶液的制备  取本品内容物0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称重，超声（功率160W,频率59kHz）30min，加甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液。

    2.2.3  阴性对照溶液的制备  取缺赤芍的处方，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。

    2.3  系统适用性试验  分别取对照品溶液、样品溶液、阴性对照溶液进样10μl，色谱图见图1。芍药苷峰保留时间为15.8min，阴性对照色谱图在芍药苷峰位置无干扰峰。

    2.4  线性关系考察  精密吸取对照品溶液2、5、10、20、40μl，按上述色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，以进样量为横坐标，进行线性回归，得方程：Y=-5.346×104+1.512×106X，ｒ=0.9997，线性范围为0.09810～1.962μg。A.对照品色谱图                        B.样品色谱图                  C.阴性对照色谱图

    图1  HPLC色谱图

    2.5  精密度试验  取对照品溶液连续进样7次，每次10μl，峰面积积分值RSD=0.7%。

    2.6  重复性试验  取同一批号（070101）样品6份，按供试品液制备方法制备，依法测定，结果芍药苷含量RSD=0.9%，表明本法重复性好。

    2.7  稳定性试验  取同一样品溶液（070101）在0、6、12、24h分别进样10μl，依法测定，芍药苷峰面积RSD=0.8%，表明样品溶液在24h内稳定。

    2.8  加样回收试验  取已知含量（0.92mg/粒）的同一样品（070101）6份，精密加入芍药苷对照品适量，按样品测定方法测定含量，计算回收率，结果见表1。 表1  回收率试验结果 

    2.9  样品测定  取不同厂家两批样品，按“2.2.2”项下方法制备样品溶液，依法测定芍药苷的含量，结果见表2。表2  样品含量测定结果

    3  讨论

    本试验考察了供试品溶液的提取方法，曾分别用稀乙醇和甲醇超声处理30min，结果后者提取得到的芍药苷含量高于前者，故采用甲醇超声提取。

    本试验采用HPLC法测定大败毒胶囊中芍药苷的含量，操作简便，专属性强，结果稳定可靠，且样品的提取方法简单，为更好地控制大败毒胶囊的质量提供了依据。    

【参考文献】
  1 卫生部.药品标准中药成方制剂，第十二册.北京：化学工业出版社，2005，11.

2 徐淑卿,柴瑞华,吴瑶.HPLC法测定痛风舒乐胶囊中芍药苷的含量.中国现代中药,2007,9（3）:24-25.

3 国家药典委员会.中国药典，2005年版一部.北京：化学工业出版社，2005，518-519.

（编辑：黄 杰）

作者单位：417000 湖南娄底，娄底市药检所