仙灵骨葆胶囊对骨折动物模型的治疗研究

【摘要】  目的 观察仙灵骨葆胶囊对骨折愈合的影响。方法 制作兔骨折模型，用仙灵骨葆胶囊治疗，观察骨折肢支撑着地时间，并于治疗后28天观测骨折肢X线片评分、骨折愈合组织形态学、血清骨钙素（BGP）、血清碱性磷酸酶（ALP）、血清Ca2+和血清P。结果 仙灵骨葆胶囊明显缩短动物骨折肢支撑着地时间，明显增加动物骨折肢X线片分值，明显增加动物骨折断端骨痂面积及类骨质面积，明显增加动物血清BGP、ALP和P，明显降低血清Ca2+。结论 仙灵骨葆胶囊具有促进骨折愈合的作用，该作用可能与其提升ALP和BGP的水平有关。

【关键词】  仙灵骨葆胶囊；骨折；组织形态学；血清生化指标

 Treatment research of XLGBC on animal model of fracture

    REN  Guang-you，LU Ling，ZHOU Ning，et al. Department of Pharmacology，Guiyang Medical College，Guiyang  550004,China

    【Abstract】  Objective  To observes the influence of Xian Ling Gu Bao capsule （XLGBC） on fracture healing.Methods  The fracture models of rabbit were made and treated by XLGBC. The support touchdown time and X-ray photograph grading of fracture extremity, fracture healing histomorphology, serum bone gla protein （BGP）, serum alkaline phosphatase （ALP,） Ca2+ and P were observed.Results  The XLGBC significantly shortened the touchdown time, increased the X-ray photograph minute value, callus area , ossein area,and the levels of BGP, ALP and P in serum, but obviously reduced the level of Ca2+.

    Conclusion  XLGBC has the function of promoting fracture healing, which may be related to its effect on the increase of ALP and BGP.

    【Key words】  Xian Ling Gu Bao capsule; fracture;histomorphology;biochemicalindex

    仙灵骨葆胶囊系国家基本药物，具有滋补肝肾、活血通络、强筋壮骨功效，临床主要用于骨质疏松症，此外尚可用于骨折病人的治疗［1,2］。本文对其进行了骨折动物模型的治疗研究。

    1  材料与方法

    1.1  实验材料

    1.1.1  药物及试剂  仙灵骨葆胶囊，贵州同济堂制药股份有限公司生产；伤科接骨片，大连海洋药业有限公司生产。

    1.1.2  实验动物  日本种大耳白兔，27只，2.31±0.18kg，雌雄兼用。由贵阳医学院试验动物中心提供。动物合格证号：SCXK-（黔）2002-0001。

    1.1.3  主要仪器  图像分析系统，HPIAS-1000型，同济医科大学千屏影像工程公司；全自动生化分析仪，Abbott Aeroset 2000型，美国雅培公司；多探头放免仪，中国科大中佳公司。

    1.2  实验方法

    1.2.1  动物骨折模型制作［3］  取日本大耳白兔，戊巴比妥耳缘静脉麻醉，仰卧位固定，左前肢去毛，皮肤常规消毒，于左前肢桡侧屈面纵行切开皮肤2～3cm，分离肌肉，避开血管神经，暴露桡骨中远段交界处，以特制钢锯横向锯断桡骨，形成3mm切损的完全性骨折。将错开的骨折端复位，逐层缝合，伤口包扎，但不固定。术后次日拆除敷料，将27只骨折动物随机分为3组（每组9只）：对照组（等容量生理盐水）、仙灵骨葆胶囊组（2g/kg）、伤科接骨片组（2片/kg）。动物均灌胃给药，每天1次，连续28天。

    1.2.2  观测指标

    1.2.2.1  骨折肢支撑着地时间的比较［3］  骨折后，动物畏痛，患肢不敢着地，故空抬患肢。随着患处的逐渐修复，始将患肢放于地上支撑躯体。自骨折手术后至患肢着地，即为支撑着地时间。

    1.2.2.2  骨折肢X线片评分比较［3］  动物骨折治疗28天，骨折肢拍X线片，通过X线片的变化，按下述标准评分：（1）错位：无错位（包括错位<0.1cm）1分；错位（包括骨折断端错位未超过其断端的1／2或骨折端轻度成角）0分。（2）外骨痂：有外骨痂1分；无外骨痂0分。（3）内骨痂：骨密度增加1分；骨密度未增加0分。（4）骨折缝：骨折缝部分模糊或消失1分；有骨折缝0分。（5）连接：骨折断端连接为一整体1分；未连接0分。（6）愈合：未愈合（无内外骨痂或骨折缝依旧）0分；骨折愈合（有内外轻度骨痂改变，同时骨折缝变浅或模糊）1分。

    1.2.2.3  骨折愈合组织学观察比较［3］  动物骨折治疗28天，处死动物，取桡骨骨折处骨干2～3cm，福尔马林固定，脱钙后，沿桡骨长轴正中线切开，脱水，石蜡包埋，HE染色，光镜观察，并通过图像分析系统定出断端间区，勾出该区类骨质及其他愈合成分所占范围，以电子扫描点计算骨痂面积及类骨质面积。

    1.2.2.4  血生化指标测定比较［4,5］  动物骨折治疗28天，取血离心，取血清，用多探头放免仪测血清骨钙素（BGP），用全自动生化分析仪测血清碱性磷酸酶（ALP）、Ca2+、P。1.3  统计学处理  实验数据以均数±标准差表示，用NDST软件进行t检验。

    2  结果

    2.1  仙灵骨葆胶囊对骨折肢支撑着地时间的影响  仙灵骨葆胶囊明显缩短动物骨折肢支撑着地时间，与对照组比较，P<0.05。见表1。表1  仙灵骨葆胶囊对兔骨折肢支撑着地时间的影响 

    2.2  仙灵骨葆胶囊对骨折肢X线片评分的影响  仙灵骨葆胶囊明显增加动物骨折肢X线片分值，与对照组比较，P<0.001。见表2、图1。表2  仙灵骨葆胶囊对兔骨折肢X线片分 值的影响

    2.3  仙灵骨葆胶囊对骨折愈合组织学的影响  仙灵骨葆胶囊明显增加动物骨折断端骨痂面积及类骨质面积，与对照组比较，P均< 0.01。见表3。

    2.4  仙灵骨葆胶囊对骨折动物血生化的影响  仙灵骨葆胶囊明显增加动物血清BGP、ALP、P，明显降低血清Ca2+，与对照组比较，P均< 0.05。见表4。表3  仙灵骨葆胶囊对兔骨折断端骨痂的影响

　　3  讨论

    骨折愈合是一个复杂的生理过程，在此过程中，多种因子共同参与协同作用，诱导新骨形成，通过骨的再生来恢复骨结构的完整性，促进骨折愈合。

    而在骨结构中，骨矿物质主要是由钙、磷等经过骨的矿化过程而形成，并沉积于骨基质中，骨中钙、磷贮积是保证骨矿物质形成的重要条件。骨骼更新是一个动态过程，骨骼不断摄取血液中的钙以供骨形成之需，同时骨吸收又将骨钙释放入血，因而测定血钙血磷具有重要意义［6,7］。表4  仙灵骨葆胶囊对兔骨折血生化指标的影响  注：与对照组比较，*P<0.05,**P<0.01

    ALP是成骨细胞功能评价的指标，其在骨的矿化过程中起重要作用：促进磷酸钙晶体沉积，提高局部磷酸的浓度，促进钙和磷酸的吸收［8］。

    BGP则是反映骨更新的特异指标，其系成骨细胞表达的基质蛋白，具有调节骨基质钙化的作用［9］。

    毋庸置疑，ALP和BGP是骨折愈合过程中的重要因子。在骨折断端的修复中，由于骨坏死区发生溶骨作用，钙释放入血，血钙升高，引起降钙素（CT）分泌增加，促进成骨活动，增加钙盐沉积，降低血钙；同时ALP活性增加，分解有机磷化合物，产生大量的无机磷酸盐离子，血磷升高。随着血钙降低，血磷升高，钙磷乘积增大，又刺激CT分泌增加，促进成骨活动，促进骨折愈合，提高骨折愈合的质量。BGP亦参与了骨折愈合过程中的成骨活动［4,10］。

    本实验结果表明：仙灵骨葆胶囊明显缩短动物骨折肢支撑着地时间，明显增加动物骨折肢X线片分值，明显增加动物骨折断端骨痂面积及类骨质面积，明显增加动物血清BGP、ALP和磷，明显降低血清钙。

    本实验结果提示：仙灵骨葆胶囊具有促进骨折愈合的作用，该作用可能与其提升ALP和BGP的水平有关。

【参考文献】
  1 吴晓光， 吴大华.仙灵骨葆联合用药治疗骨质疏松性骨折的临床研究.中国中医骨伤科杂志，2008，16（4）：20-22.

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3 陈新宇，叶军，刘德玉，等.九香接骨丹促进骨折愈合的动物实验.中医正骨，2001，13（8）：9-11.

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5 陈淑英.骨转换标准物的检测及临床应用.浙江中医学院学报，2001，25（2）：18-20.

6 韩旭华，王世民，杨文珍，等.维甲酸对大白鼠骨代谢影响的实验研究.山西中医学院学报，2000，1（4）：4-6.

7 刘康，季晖，李绍平，等.三种大鼠骨质疏松模型的比较研究.中国骨质疏松杂志，1998，4（4）：13-15.

8 Kato Y,Lwamoto M.Fibroblast growth factor is an inhibitor of chondrencyte terminal differentiation.J Biol Chem，1990，265：5903.

9 Pavlin D,Zadro R,Gluhak-Heinrich J.Temporal pattern of stimulation of osteoblast-associated genes duringmechanically-induced osteogenesis in vivo:early responses of osteocalcin and type I collagen.Connect Tissue Res，2001，42（2）：135-148.

10 王华松，许申明.骨碎补对骨折愈合中TGF-β1表达的影响.中国中医骨伤科杂志，2001，9（4）：10-13.

（编辑：汪 洋）

作者单位：1 550004 贵州贵阳，贵阳医学院药理学教研室 2 贵州贵阳，贵阳市第二人民医院 3 贵州贵阳，贵州同济堂制药股份有限公司