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【摘要】 目的 比较HPLC法和UV法两种方法测定阿德福韦酯片的含量。方法 HPLC法：色谱柱为岛津C18色谱柱(150mm×4.6mm，5μm)，以乙腈-0.02mol/L磷酸氢二钾溶液(用磷酸调节pH值为5.0)(40∶60)为流动相，检测波长为261nm;UV法：以0.1 mol/L盐酸溶液为溶剂，在258nm波长处测定。结果 HPLC法：阿德福韦酯进样量在0.41～4.09μg范围内线性关系良好，r=0.9999;UV法：阿德福韦酯浓度在4.21～42.14μg/ml范围内线性关系良好，r=0.9999。结论 两种方法均可作为阿德福韦酯片的含量测定方法。
【关键词】 阿德福韦酯片;含量测定;高效液相色谱法;紫外-可见分光光度法
Determination of Adefovir Dipivoxil Tablets by HPLC and UV
WANG Chao1, WANG Changbin2, YUAN Yu2.1. Jiangsu Province Hospital of TCM, Nanjing, 210029;2. Jiangsu Aosaikang Pharmaceutical Co. Ltd., Nanjing, 211112
【Abstract】 Objective To compare the HPLC method and UV method when determining the content of Adefovir Dipivoxil Tablets.Methods The HPLC method was performed on a C18 column (150 mm×4.6 mm, 5μm), with a wavelength of 261nm and acetonitrile-0.02 mol·L-1 Potassium Phosphate Dibasic solution (pH value 5.0 through phosphate acid) as the mobile phase. UV: To determine Adefovir Dipivoxil at the wavelengh of 258nm in 0.1 mol·L-1 hydrochloric acid solution. Results HPLC: Within the range of 0.41μg～4.09μg, there was a good linear correlation, r=0.999 9. UV: Within the range of 4.21μg·mL-1～42.14μg·mL-1, there was a good linear correlation, r=0.999 9. ConclusionTwo methods can be both used to assay Adefovir Dipivoxil Tablets.
【Key words】 Adefovir Dipivoxil Tablets; assaying; HPLC; UV
阿德福韦酯(Adefovir dipivoxil)是由Gilead Sciences公司研制开发的新型开链核苷酸类广谱抗病毒药物，美国FDA于2002年11月批准其用于乙型肝炎的治疗，其长期使用疗效稳定、病毒变异率低，在一定程度上减小了第一代核苷类药物诱发的病毒变异给医生带来的困扰[1～3]。我国SFDA自2005年起批准了多家片剂和胶囊剂上市，给患者带来了福音。笔者依据其分子结构同时参考相关文献[4]建立了HPLC法和UV法分别测定阿德福韦酯片的含量并进行比较，为确定本品的含量测定方法提供依据，为患者的安全使用提供保障。
1 仪器与试药
1.1 仪器 LC-10ATvp高效液相色谱仪、UV-2401PC紫外-可见分光光度计(日本Shimadzu公司)。
1.2 试药 阿德福韦酯片(江苏奥赛康药业有限公司，批号 20070109，20070124，20070210);阿德福韦酯对照品(江苏奥赛康药业有限公司，批号 20060912);乙腈(美国Tedia公司，色谱纯);磷酸，磷酸氢二钾，盐酸(南京化学试剂有限公司，分析纯);水为重蒸水。
2 方法与结果
2.1 高效液相色谱法
2.1.1 色谱条件 色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(岛津C18柱，150mm×4.6mm，5μm);流动相为乙腈-0.02mol/L磷酸氢二钾溶液(用磷酸调节pH值为5.0)(40∶60);检测波长为261nm;流速为1.0ml/min;进样量为20μl。
2.1.2 溶液配制
2.1.2.1 混合溶剂 乙腈-水(40∶60)。
2.1.2.2 对照品溶液 取以五氧化二磷为干燥剂经50℃减压干燥至恒重的阿德福韦酯对照品适量，精密称定，加混合溶剂溶解并稀释制成0.1mg/ml的溶液作为对照品溶液。
2.1.2.3 供试品溶液 取阿德福韦酯片细粉适量，精密称定，加混合溶剂溶解并稀释制成含阿德福韦酯0.1mg/ml的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.1.2.4 辅料溶液 取阿德福韦酯片辅料适量，照“2.1.2.3”项下方法配制成辅料溶液。
2.1.3 专属性试验 取对照品溶液与辅料溶液照“2.1.1”项下的色谱条件进样分析，结果辅料对本品的含量测定无干扰。
2.1.4 线性关系试验 取以五氧化二磷为干燥剂经50℃减压干燥至恒重的阿德福韦酯对照品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取该溶液1、3、5、7和10ml置于50ml量瓶中，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，分别进样20μl，记录色谱图，以峰面积A对进样量W(μg)进行线性回归，得阿德福韦酯的回归方程：
A=-1299.24+92893.62W，r=0.9999
结果表明阿德福韦酯的进样量在0.41～4.09μg范围内线性关系良好。
2.1.5 定量限 照“2.1.1”项下的色谱条件，按信噪比S/N=10计算定量限，结果为9.9ng。
2.1.6 溶液稳定性 取供试品溶液在室温下放置，分别于不同的时间各取20μl进样测定峰面积，8h内峰面积的RSD为0.09%。结果表明供试品溶液在室温下放置8h基本稳定。
2.1.7 进样精密度 取供试品溶液，连续进样5次，阿德福韦酯峰面积的RSD为0.05%，结果表明进样精密度良好。
2.1.8 重复性试验 取批号为20070109的样品按“2.1.2.3”项下的方法平行制备6份供试品溶液，分别测定阿德福韦酯片的含量，RSD为0.14%，结果表明重复性良好。
2.1.9 含量测定 取对照品溶液与供试品溶液各20μl分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。结果20070109、20070124、20070210三批的含量分别为99.36%，98.86%和99.45%。
2.2 紫外-可见分光光度法
2.2.1 溶液配制
2.2.1.1 对照品溶液 取以五氧化二磷为干燥剂经50℃减压干燥至恒重的阿德福韦酯对照品适量，精密称定，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成20μg/ml的溶液作为对照品溶液。
2.2.1.2 供试品溶液 取阿德福韦酯片细粉适量，精密称定，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成含阿德福韦酯20μg/ml的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.2.1.3 辅料溶液 取阿德福韦酯片辅料适量，照“2.2.1.2”项下方法配制成辅料溶液。
2.2.2 波长的选择 取对照品溶液与辅料溶液分别在190～450nm波长范围内绘制吸收曲线，结果阿德福韦酯在258±2nm波长处有最大吸收，而辅料在此波长处无吸收，故选择258nm作为测定波长。
2.2.3 线性关系试验 取以五氧化二磷为干燥剂经50℃减压干燥至恒重的阿德福韦酯对照品约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成0.2mg/ml的溶液，精密量取该溶液1、3、5、7和10ml分别置于50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，在258nm波长处测定吸光度，以吸光度A对测定浓度C(μg/ml)进行线性回归，得阿德福韦酯的回归方程：
A=-0.004836+0.02616C;r=0.9999
结果表明阿德福韦酯的浓度在4.214～42.14μg/ml范围内线性关系良好。
2.2.4 溶液稳定性 取供试品溶液在室温下放置，分别于不同的时间取样测定吸光度，8h内吸光度的RSD为0.22%。结果表明供试品溶液在室温下放置8h基本稳定。
2.2.5 重复性试验 取批号为20070109的样品按“2.2.1.2”项下的方法平行制备6份供试品溶液，分别测定阿德福韦酯片的含量，RSD为0.29%，结果表明重复性良好。
2.2.6 含量测定 取对照品溶液与供试品溶液，分别在258nm波长处测定吸光度，计算。结果20070109、20070124、20070210三批的含量分别为99.59%、98.72%和99.48%。
3 讨论
本品分子结构中含有酯键，破坏性试验表明其在酸性、碱性条件下均不稳定，而乙腈-水(40∶60)为中性且其配比相同于流动相的配比，既可以避免阿德福韦酯的降解，又可以最大限度地减小因溶剂有别于流动相而对分析过程的干扰。因此，选用乙腈-水(40∶60)作为HPLC法中配制样品溶液的溶剂。
分别采用HPLC法和UV法测定本品的含量，两者方法学的试验结果表明其线性、稳定性、精密度、重复性等均符合要求，测得本品3批样品的含量基本一致，因此两种测定方法均可作为阿德福韦酯片的含量测定方法。考虑到UV法的专属性、精密度不如HPLC法强，建议将HPLC法作为成品的测定方法，UV法对HPLC法的测定起到佐证作用，同时因其操作相对简便快捷，可用于生产过程中的中间体质控等。
【参考文献】
1 金慧萍，李中东，焦正.治疗乙肝病毒新药-阿地福韦酯.中国临床药学杂志，2004，13(4)：245-246.
2 蒋晔，徐智儒，张晓青. 抗乙肝病毒新药-阿德福韦酯.中国药学杂志，2004，39(10)：796-798.
3 Hydziyannis SJ, Tassopoulos NC, Heathcote EJ,et al.Long-term therapy with adefovir dipivoxil for HBeAg-negative chronic hepatitis B.N Engi J Med,2005,352：2673-2681.
4 武向峰，柴逸峰，沈娟，等.RP-HPLC法测定阿德福韦酯片中阿德福韦酯含量和有关物质.药物分析杂志，2005，25(5)：573-575.
作者单位：1 210029 江苏南京，江苏省中医院 2 211112 江苏南京，江苏奥赛康药业有限公司