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【摘要】 目的 采用高效液相色谱法测定复方鱼腥草颗粒中连翘苷的含量。方法 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-水（25：75）为流动相，流速1.0 ml/min，检测波长277nm。结果 连翘苷进样量在0.20～1.60μg范围内与峰面积具有良好的线性关系，相关系数0.9999，回收率99.58%。结论 本方法操作简便，精密度好，结果准确可靠，适用于复方鱼腥草颗粒中连翘苷含量的测定。
【关键词】 高效液相色谱法； 连翘苷； 复方鱼腥草颗粒
Abstract】 Objective To determine Forsythin content in Compund Yuxingcao Granula by HPLC. Methods HPLC analysis was carried out with Hypersill BDS C18 and Acetonitrile-Water （25：75） as mobile phase. The flow rate was 1.0 ml·min-1 and the detection wavelength was 277nm. Results The calibration curve was linear in the range of 0.20～1.60?g for Forsythin （r=0.9999 ）. The average recovery （n=6） was 99.58%. Conclusion The method is rapid, accurate , reliable and suitable for determination of Forsythin in Compund Yuxingcao Granula. 【Key words】 HPLC; Forsythin; Compund Yuxingcao Granula
复方鱼腥草颗粒为临床上疗效确切，且常用的清热解毒药品，主要用于咽喉肿痛、急性咽炎、扁桃体腺炎等，由鱼腥草、黄芩、金银花、板蓝根、连翘组成。原标准［1］中未对主药之一连翘进行含量检测，而连翘中杂质青翘与老翘的多少，直接影响连翘苷的含量，为确保该产品的疗效及有效控制产品质量。本文采用高效液相色谱法对其连翘苷含量进行了测定，该方法操作简单，精密度好，结果准确可靠。
1 仪器与试药
TSP型高效液相色谱仪（P4000，UV2000），连翘苷对照品（含量测定用，批号：0821-9602）购自中国药品生物制品检定所；乙腈、甲醇均为色谱纯，水为重蒸馏水；药品购自市场（广西邦奇药业有限公司，批号：081224 ）。
2 方法及结果
2.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱为VP-ODS C18柱（4.6mm×150mm，5μm）；流动相为乙腈-水（25：75）；流速为1.0ml/min；检测波长为277 nm；检测温度为室温；理论板数以连翘苷峰计算应不低于3000。
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取连翘苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。
2. 3 供试品溶液的制备 取本品5袋的内容物，精密称定，研细，取约6.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，浸渍过夜，超声处理25min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，蒸至近干，加中性氧化铝1g拌匀，加置中性氧化铝柱（100～120目，1.5g，内径1.5cm）上，用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣用50%甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2. 4 阴性对照溶液的制备 按处方取缺连翘的其他药味，按处方工艺制成空白制剂，再按供试品溶液制备方法制备并测定，结果空白溶液在与连翘苷对照品相同保留时间处未显色谱峰，故认为，其他组分对测定无干扰，结果见图1。
2. 5 线性关系的考察 精密量取连翘苷对照品溶液（0.200mg/ml）1、2、4、6、8ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以对照品的进样量X （μg） 对峰面积Y进行线性回归，回归方程为：Y=9.36×105X-1.62×103 r=0.9999。结果表明：连翘苷进样量在0.20～1.60μg范围内与峰面积具有良好的线性关系。
图1 复方鱼腥草颗粒的HPLC（略）
A.对照品 B.供试品 C.阴性对照 I.连翘苷
2. 6 精密度试验 精密吸取对照品溶液，连续进样5次，峰面积积分值的RSD为0.89%。
2.7稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，在0.5、4、8、24h分别按上述条件测定，结果表明，在24h内供试品溶液基本稳定。
2.8 重复性试验 取同一批样品，平行制备5份供试品溶液，分别按上述方法测定含量，平均含量为0.732mg/袋， RSD为0.97%。
2. 9 回收率试验 精密称取已知含量的同一批号（批号081224，含量0.12mg/g）样品约6.0g，分别精密加入连翘苷对照品溶液（0.24mg/ml）3ml ，按供试品溶液制备方法进行提取及含量测定，计算回收率，结果见表1。
表1 回收率试验（略）
2.10 样品的含量测定 精密称取3批复方鱼腥草颗粒样品，按供试品项下方法试验，分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl ，注入液相色谱仪，记录峰面积，以外标法计算连翘苷含量，测得结果分别为0.721、0.711、0.736mg/袋，平均为0.723mg/袋。图谱见图1。
3 讨论
3.1 供试品提取过程中，为缩短提取时间，曾尝试直接超声30min及60min提取，而不放置过夜，试验结果低于现方法测定含量约25%，因而未被采用。中性氧化铝的用量，对试验结果也有一定的影响，可能由于中性氧化铝对样品有吸附作用。
3.2 本方法的阴性对照品在与连翘苷对照品的吸收峰处无干扰峰，且方法简单、具重复性，试验的精密度亦良好，可以作为复方鱼腥草颗粒的质量标准，建议在修订标准时，增加连翘苷的含量测定。
【参考文献】
1 《国家药品标准》WS3-666 （ Z-127 ）-2004 （ Z ）