100种中药材抗氧化活性筛选

【摘要】  目的 本实验研究了100种中药材的抗氧化活性，并测定它们的乙醇提取液对1，1-二苯基-2-苦肼基自由基（DPPH）的清除作用。其中虎杖、土荆皮、地枫、地榆等4种中药材在浓度为0.25mg/ml时对DPPH的清除作用均超过50%，具有较强的抗氧化作用。尤其是地榆在浓度为0.25mg/ml时，对DPPH的清除作用高达78%。

【关键词】  中药材；1，1-二苯基-2-苦肼基自由基（DPPH）;抗氧化活性；虎杖；土荆皮；地枫；地榆

           The antioxidant of 100 kinds of Chinese traditional and herbal drugsJIN Shan-hua, JIN Guang-shi, ZHU Xing-shan.Yanbian Chinese Medical Hospital, Jilin, 133000bstract】  The experiment studied the antioxidant of 100 kinds of Chinese traditional and herbal drugs. The scavenging effect of alcohol extracts from these medicinal drugs on 1,1-dipheny-2-picryhydrazy （DPPH） was determined using spectrophotometric method. The results showed that the antioxidaitive activity of Shanguisorba officinalis L. was the strongest, followed by Polygonum cuspidatum Sied.et Zucc, Pseudolarix kaempferi gord and Illicium difengpi K.I.B.et K.I.M. When the concentration of S.officinalis was 0.25 mg/mL, its inhibition was 78%.【Key words】  Chinese traditional and herbal drugs; 1,1-dipheny-2-picryhydrazy （DPPH）; antioxidant activity; Polygonum cuspidatum Sied.et Zucc; Pseudolarix kaempferi gord; Illicium difengpi K.I.B.et K.I.M.; Shanguisorba officinalis L.

　　自20世纪50年代以来，由于生活水平的提高，卫生条件和生存环境的改善，老年人普遍长寿，但相应地伴随年龄而来的是许多疾病，如心血管疾病、帕金森症等。据目前研究所知，这些疾病主要是人体内各种外源性和内源性自由基在一定外界环境下与生物内的许多物质如脂肪酸、蛋白质等作用，夺取它们的氢原子，造成相关细胞的结构与功能的破坏，自由基过氧化物的积累所致［1］。自由基不仅引发食用油脂和含脂肪食品的酸败（脂质过氧化），油脂本身受破坏而丧失营养，而且其氧化产物和中间物会伤害生物膜、酶、维生素、蛋白质及活细胞功能，这些产物中有些还是公认的致癌物质。因此，寻找一些天然的、安全的抗氧化物添加于食品、药品和化妆品中是非常有必要的。

　　我国中药材资源极其丰富，是天然抗氧化物质的重要来源。中药材的抗氧化性已经引起了充分的重视，如从中药中发现的黄酮类、多酚类和多糖类等均表现出强的抗氧化活性［2，3］。所以从中药材中筛选抗氧化和清除自由基的活性物质是可行且有效的。

　　本研究对100种中药材的清除自由基活性的作用分别进行了测定。在测定中采用的1，1-二苯基-2-苦肼基自由基在有机溶剂中是一种稳定的自由基，呈紫色，它在517nm处有强吸收，当加入自由基清除剂时，DPPH的单电子被配对而使其颜色变浅，在最大吸收波长处的吸光度变小，而且这种颜色变浅的程度与自由基清除剂的清除能力成正比，从而以评价试验样品的抗氧化能力。此抗氧化能力用用抑制率来表示，抑制率越大，抗氧化性越大。

　　1  实验部分

　　1.1  实验材料

　　1.1.1  中药材  100种中药材（见表1）均购于延吉市中医院。

　　1.1.2  试剂  DPPH（1，1-二苯基-2-苦肼基自由基，美国SIGMA公司），DMSO（二甲基亚砜，沈阳市东兴试剂厂），无水乙醇（北京北化精细化学药品有限责任公司），维生素C（美国SIGMA公司）。

　　1.1.3  仪器  BS224电子分析天平；W2-180SP旋转蒸发仪；668型真空干燥箱；SHB-B95循环水式多用真空泵；SUNRISE酶标仪。

　　1.2  实验方法

　　1.2.1  中药材的提取  分别将适当切碎的100种中药材放入500ml锥形瓶中，各加入适量乙醇，在室温浸提2次（5天1次），过滤后合并提取液，用旋转蒸发仪浓缩，并用真空干燥机干燥，备用。

　　1.2.2  DPPH自由基清除能力的测定   依据Li［4］和Wang［5］的方法，利用96孔酶标板和酶标仪进行逐级筛选，具体操作步骤如下。

　　1.2.2.1  试剂的配制  二苯代苦味酰肼（DPPH）溶液：称取3.2mgDPPH溶解于40ml无水乙醇中，摇匀，待用。植物提取物溶液：用二甲基亚砜（DMSO）作为溶剂配成浓度为5mg/ml的溶液，待用。维生素C溶液（Vc）溶液：用二甲基亚砜（DMSO）作为溶剂配成浓度为0.5mg/ml的溶剂，待用。

　　1.2.2.2  样品的筛选  取10μl的样品溶液放入酶标板中，再加入90μl的DPPH溶液，此时DPPH的浓度为500μg/ml,以维生素C溶液做阳性对照，以DPPH溶液作为标准，利用以下公式计算各种样品的清除率，如果样品的清除率超过50%，进行下一步筛选，将样品对DPPH的浓度依次稀释为250μg/ml,100μg/ml,25μg/ml,以上法逐级筛选，其中每个样品测定3次。

　　清除率（%）=1 ［DPPH］t/［DPPH］t=0×100%

　　式中：［DPPH］t=0为0时刻体系中二苯代苦味酰基自由基的起始浓度；［DPPH］t为t时刻体系中二苯代苦味酰基自由基的浓度。

　　2  结果

　　100种中药材抗氧化能力的实验结果（见表1）。

　　表1  100种中药材提取物在不同浓度下对DPPH的清除率（略）

　　从表1可以看出：100种中药材提取物溶解于二甲基亚砜（DMSO），并配成浓度为5mg/ml时对DPPH均呈现出不同程度的抑制作用，其中：肉桂、清风藤、虎杖、红藤、土荆皮、黄柏、乌药、贯众、降香、柿蒂、紫荆皮、大黄、公丁香、田基黄、款冬花、雷公藤、半枝莲、黄药子、地枫、姜黄、地榆、苎麻根、苦楝皮、桂皮和厚朴等25种中药材对DPPH的清除作用都超过80%，它们具有较强的抗氧化作用。将100种中药材提取液稀释2倍、5倍、10倍、20倍后再测抑制率，结果（见表1）表明虎杖、土荆皮、地枫和地榆等4种中药材对DPPH的清除率均超过50%，尤其是地榆对自由基的清除率达78%,在100种中药材中抗氧化作用最强。

　　据文献报道：地榆具有凉血止血、解毒敛疮等功效［6～8］，并用于血热所致的各种出血症，尤适用于下焦热盛、迫血妄行之便血、血痢、痔血、崩漏等下部出血症，如治大便下血［8］。而且研究表明：地榆提取物可以抑制肿瘤坏死因子的活性［9］，也可以保护皮肤降低紫外线的伤害［10，11］。

　　3  讨论

　　抗坏血酸（VitC）是一种常用的抗氧化剂，有很强的还原特性，是人体内重要的水溶性抗氧化物质，对人血浆中所存在的自由基是最为有效的清除剂之一［12］，本文用作参照物。研究表明，在有机体稳态平衡失调的情况下体内过剩的自由基和活性氧的产生反应与许多疾病的发生发展及有机体的衰老过程密切相关。自由基活性氧会破坏生物大分子（如蛋白质酶DNA等），引起DNA突变或断裂、功能蛋白和膜结构的破坏。自由基损伤机体是加速人体老化的重要原因。补充抗氧化营养素有助于减轻氧化损伤及延缓衰老［13］。因此，寻找能有效清除自由基活性的抗氧化食物和中药材对于保护人类健康有重要意义。
   
　　［注释：（1）实验中测出维生素C在浓度为05mg/ml时对DPPH的清除率是92.70%；（2）反应30min后用酶标仪测出的。］

【参考文献】
  1 Taso R ,Deng ZY.Seperation procedures for naturally occurring antioxidant phytochemicals.Journal Chromatography B,2004,8（12）:85-99.

　　2 Nicole C.Role of flavonoids in oxidative stress.Current Topics in Medicinal Chemistry,2001,1（6）:569-590.

　　3 Lee SE,Hwang HJ,Ha JS ,et al.Screening of medicinal plant extracts for antioxidant activity.Life Sciences,2003,73（2）:167-179.

　　4 Li G,Min B,Zheng C,et al. Neuroprotective and free radical scavenging activities of Phenolic compounds .Arch Pharm Res,2005,28,804-809.

　　5 Wang H,Cao G ,Prior RL.Total Antioxidant capacity of fruits.J Agric Food Chem,1996,44,701-705.

　　6 吕侠卿.中药鉴别大全（2002）.长沙：湖南科学技术出版社，2002.

　　7 江苏新医学院.中药大辞典（1999）.上海：上海科学技术出版社，1999.

　　8 原思通.医用中医饮片学（2001），北京：人民卫生出版社，2001.

　　9 Cho JY,Yoo ES,Cha BC,et al .Theinhibitory effect of triterpenoid glycosides originating from Sanguisorba officinalis on tissue factor activity and the production of THF alpha.Planta Med，2006,72（14）:1279-1284.

　　10 Tsuka K,Moriwaki S ,Fujimura T，et al .Inhibitory effect of an extract of Sanguisorba officinalis L.on ultraviolet B induced photodamage of rat skin.Biol Pharm Bull,2001,24（9）:998-1003.

　　11 Hachiya A,Kobayshi A，Ohuchi A,et al.The Inhibitory effect of Sanguisorba officinalis L.on ultraviolet B induced pigmentation via the suppression of endothelin converying enzyme lalpha.Biol Pharm Bull,2001,24（6）:688-692.

　　12 Mehlhorn RJ.Ascorbate and dehydroascorbic acid mediated reduction of free radicals in the human erythrocyte.J Biol Chem，1991,266:2724-2730.

　　13 方允中.自由基生物学的理论与应用.北京：科学出版社，2002.