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【摘要】 目的 测定血管宁胶囊中芦丁的含量。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为Eclipse XDB-C18(250mm×4.6mm，5μm);流动相：乙腈-2%冰醋酸(18：82);流速：1.0ml/min;检测波长：360nm。结果 芦丁分别在0.2～2.0μg范围内具有良好线性关系，平均回收率为97.79%(RSD=1.59%, n=6)。结论 该法可用于血管宁胶囊中芦丁的含量测定。
【关键词】 血管宁胶囊;芦丁;HPLC法
【Abstract】 Objective To determine the contents of Rutin in Xueguanning Capsules.Methods The HPLC analysis was carried out on XDB-C18 column (250mm×4.6mm，5μm), the mixture of acetonitrile -2% acetic acid(18：82)was used as the mobile phase, the flow rate was 1.0mL/min，the detection wavelength was at 360nm.Results The linear range of Rutin was 0.2～2.0μg, the average recovery of this method was 97.79% and the RSD was 1.59%.Conclusion The method can be applied in quantitative determination of the preparation.
【Key words】 Xueguanning Capsule; Rutin; HPLC
血管宁胶囊是甘肃省永登县医院临床使用多年的医院制剂，由槐米经科学加工精制而成，具有凉血止血、疏肝平血的功效，能有效降低血管脆性，恢复血管弹性。临床用于治疗动脉硬化、脑卒中、心脑血管等疾病，也可作为高血压病的辅助治疗药物，具有平稳而持久的降压作用。槐米的主要有效成分为芦丁，为有效控制该制剂的内在质量，本文选用HPLC法测定血管宁胶囊中芦丁(Cinobufagin，C)和(Resibufogenin，R)的含量，方法简便、准确，灵敏度高，重现性好，可很好的控制制剂的内在质量。
1 仪器与试药
Agilent 1200高效液相色谱仪、Agilent 1200 DAD 二极管阵列检测器(美国Agilent 公司);SB5200超声波清洗器(上海Branson 公司);Milli Q超纯水机(法国Millipore公司);血管宁胶囊(甘肃省永登县医院，批号081202，081215，081226);芦丁(中国药品生物制品检定所，批号0080-0815);乙腈为色谱纯;水为超纯水;其余试剂均为分析纯。
2 色谱条件
Eclipse XDB-C18(250mm×4.6mm，5μm);流动相：乙腈-2%冰醋酸(18：82);流速：1.0ml/min;检测波长360nm。
3 试验方法
3.1 系统适应性试验 测定波长选择，以芦丁对照品溶液进行紫外扫描(200～370nm)，结果表明芦丁在254nm与360nm时均有较强的吸收，对比芦丁在这两个波长下测得的色谱图(见图1)，结果在360nm处测得的色谱峰峰形对称尖锐，因此，选择360nm作为芦丁的检测波长。照“4.1”、“4.2”项下方法制备供试品及对照品溶液，按两项色谱条件，各进样10μl，测得HPLC图谱(见图2、图3)。图谱表明本法芦丁色谱峰分离度良好，因是槐米单味制剂，所以没有做阴性对照。理论塔板数按芦丁峰计算为6800。
3.2 线性关系的考察 精密吸取芦丁对照品贮备溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10ml于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，各进样10μl，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积值为纵坐标，芦丁量(μg)为横坐标绘制标准曲线，计算的回归方程分别为：
芦丁：Y=1145.2X+285.05 r=0.9998
表明芦丁分别在0.2～2.0μg范围内具有良好线性关系。
图1 芦丁光谱图
图2 对照品色谱图(A芦丁)
图3 样品色谱图(A芦丁)
3.3 稳定性试验 取血管宁胶囊样品溶液(批号为081202)在0、0.5、1、2、4、8h分别进样10μl，记录峰面积，结果芦丁峰面积的RSD为1.31% 。可见供试品溶液在8h内稳定。
3.4 精密度试验 取“4.2”项下对照品溶液，进样10μl，重复进样7次，结果芦丁峰面积的RSD为0.62%。
3.5 重现性试验 取血管宁胶囊(批号为081202)，平行6份样品，按样品测定法测定，结果每粒含芦丁平均为1.22mg(RSD=1.7%)，表明本法重现性较好。
3.6 回收率试验 采用加样回收法，取已测知含量的血管宁胶囊(批号081202，含量为162.18mg/g)样品内容物6份，精密称定，分别精密加入芦丁对照品适量(约16mg)，按“4.1”样品溶液制备项下操作，依法制备、进样、记录色谱图、计算回收率，结果芦丁平均回收率分别为97.79%，见表1。表1 回收率试验结果
4 样品测定
4.1 血管宁胶囊样品溶液的制备 取装量差异下的胶囊内容物0.2g，精密称定，置50ml容量瓶中，加甲醇适量，超声处理40min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取初滤液2ml，置10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。进样前需经0.45μm的微孔滤膜滤过。
4.2 对照品溶液的制备 精密称取减压干燥至恒重的芦丁对照品，加甲醇制成0.2mg/ml 的溶液，作为对照品贮备溶液，精密吸取芦丁对照品贮备溶液5ml，置10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液。
4.3 测定结果 分别精密吸取对照品与样品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录色谱图，以外标法计算样品中芦丁的含量，结果见表2。
5 讨论
5.1 流动相的选择 参考文献[1～4]方法先后选择了甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)，甲醇-水-冰醋酸(40：57：3)，甲醇-1%冰醋酸溶液(34：66),甲醇-0.4%磷酸(35：65)作为流动相进行相关试验，均未取得满意的结果。后改用乙腈-2%冰醋酸(18：82)作为流动相，HPLC色谱分离效果好，峰形对称尖锐，结果令人满意。表2 样品测定结果
5.2 提取溶媒的选择 分别采用乙醇、60%甲醇、甲醇进行提取比较试验，结果表明，样品用甲醇超声提取40min效果最佳，故样品采用甲醇作为提取溶剂。
5.3 提取方法的选择 取血管宁样品3份各0.2g，精密称定，分别进行超声、热回流、冷浸3种方法进行提取比较试验，结果表明超声提取效果较好，且超声提取法简便快速，故采用超声提取作为样品提取方法。
【参考文献】
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