周期型马来丝虫副肌球蛋白基因克隆、序列分析及编码产物B细胞表位预测

2008年03月06日 《中华传染病杂志》-2007年25卷11期 -655-658页 医学空间（MEDcyber.com）3月6日消息，该项研究目的是克隆周期型马来丝虫副肌球蛋白（BmPmy）基因，进行序列测定、分析及编码产物的B细胞表位预测。方法采用从周期型马来丝虫虫体中抽提总RNA，以mRNA为模板，RT-PCR法体外扩增BmPmy基因，扩增产物经初步鉴定后将其克隆人pGEM—T载体，转化E．coliDH5a，筛选阳性克隆，进行双酶切及PCR扩增鉴定，获得阳性重组质粒pGEM—TBmPmy，经测序验证，并进行同源性比较。应用5种参数和方法对其编码产物进行B细胞表位预测。实验结果，RT-PCR扩增出一条约2640bp的特异性条带，重组质粒双酶切的PCR结果与预期相符，DNA序列分析与基因库已知的基因序列同源性为99％。经表位预测分析，BmPmy的B细胞表位可能在54～66位、144～152位、770～780位和834～845位氨基酸区域。由此得出结论，成功构建了BmPmy重组质粒pGEM—T克隆载体，为进一步研究该基因的功能提供了条件。