嗜酸粒细胞亲合素N端突变体重组腺病毒在小鼠变应性鼻炎中的作用

2006年06月20日 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2006 Vol.41 No.3 P.176-180 9 （重庆）为了获取人嗜酸粒细胞亲合素(Eotaxin)N端突变体(Met/Eotaxin)重组腺病毒，探讨其在小鼠变应性鼻炎中的作用。研究者从人外周血单个核细胞总RNA中克隆人400 bp的Eotaxin基因,通过N端点突变获取Met/Eotaxin基因，构建pAdtrack-CMV-Met/Eotaxin腺病毒穿梭质粒；将该质粒在大肠杆菌BJ5183中与腺病毒基因组质粒进行同源重组；将Met/Eotaxin重组腺病毒载体在AD293细胞中包装、扩增获取Met/Eotaxin重组腺病毒(Ad-Met/Eotaxin)；采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction， PCR)和蛋白印迹杂交(Western blot)对Met/Eotaxin重组腺病毒的正确性进行鉴定。采用卵清蛋白(ovalbumin， OVA)致敏和激发诱导小鼠变应性鼻炎，40只小鼠随机分为变应性鼻炎组和Ad-Met/Eotaxin组。Ad-Met/Eotaxin组在每次激发前30 min予以每只小鼠2 ml滴度为5×109 pfu/ml的Ad-Met/Eotaxin腹腔注射。比较二组动物变应性鼻炎症状和鼻黏膜形态学改变，并在荧光显微镜下观察腺病毒转染效率标志物--绿色荧光蛋白在鼻黏膜等组织中的表达。结果PCR和Western blot结果显示Ad-Met/Eotaxin构建正确；Ad-Met/Eotaxin腹腔注射后可高效转染小鼠鼻黏膜；Ad-Met/Eotaxin可显著减轻小鼠变应性鼻炎症状以及鼻黏膜形态学改变。可见 Ad-Met/Eotaxin具有阻断小鼠变应性鼻炎的作用。