山东大学生科院最新研究解析MCM

来自山东大学生命科学学院，国家糖工程技术研究中心等处的研究人员通过对人MCM7N-端融合蛋白的原核表达、纯化，深入研究了其与AR蛋白相互作用，为了解MCMp蛋白家族的作用机制提供了重要的依据。



领导这一研究的是山东大学生科院顾黎博士，其早年毕业于延安医学院，科研方向为糖生物学和肿瘤细胞生物学，近年来所做工作主要包括CHO细胞表达糖基化干扰素，抗肿瘤糖基化药物研究，人糖基转移酶的单克隆抗体制备和糖脂脂质体研究等。



微小染色体维持蛋白(minichromosome  maintenance  proteins,  MCMp)家族是一组与DNA复制有密切关系的蛋白，Mcm7是微小染色体维持蛋白家族成员之一，与其他的Mcm蛋白形成异多聚体,调节DNA的复制，它与转录成分关联，与RNA合成即转录有关，并且增殖细胞或组织高表达Mcm7，可以作为肿瘤生物标志的候选因子。



在这篇文章中，研究人员制备人MCM7  N-端的GST融合蛋白（GST-MCM7N），研究其是否和雄激素受体（AR）蛋白存在直接的相互作用。



首先研究人员利用RT-PCR获得长度为744  bp的人mcm7  基因N-端cDNA碱基片段，把该片段构建到原核表达载体pGEX-5x-3中，转化大肠杆菌BL-21菌株。经IPTG诱导菌株基因表达产生了GST-MCM7N融合蛋白，之后使用Glutathione  Sepharose  4B球珠分离纯化。利用GST  pull-down  技术把纯化的融合蛋白分别和前列腺癌细胞LNCaP细胞裂解液及基因工程获得的AR蛋白孵育，检测MCM7蛋白的  N-端是否和AR蛋白直接相互作用。



结果他们发现，酶切鉴定及基因测序表明，mcm7  基因cDNA的  N-端片段被构建到表达载体pGEX-5x-3中，另外SDS-PAGE及Western  blotting结果分别显示这一研究获得了GST和GST-MCM7N融合蛋白，GST  pull-down  结果证实GST-MCM7N和AR蛋白存在相互作用。研究人员认为MCM7蛋白的N-端和AR蛋白至少在体外可以发生直接的相互作用。