hTERT-siRNA及hTR-siRNA的合成及对Hut78细胞端粒酶活性的影响

2006年03月23日 中华皮肤科杂志 2005 Vol.38 No.11 P.685-688 8 （南京）为了探讨合成端粒酶逆转录酶(hTERT)基因及端粒酶RNA(hTR)的小干扰RNA(siRNA)对皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)细胞株Hut78端粒酶活性的影响，研究者采用体外转录法分别合成两条hTERT-siRNA及hTR-siRNA。采用siRNA直接处理细胞裂解液及磷酸钙共沉淀法将siRNA转染入Hut78细胞两种处理方式，应用端粒酶重复序列扩增聚合酶链反应(TRAP-PCR)及聚丙烯酰胺凝胶电泳银染检测端粒酶活性的变化。结果体外转录法能高效合成siRNA，产量达22.4μg/40 μL siRNA合成体系。经250 ng siRNA直接处理细胞裂解液后，可高效降低端粒酶的活性，抑制率达87%左右.30 ng siRNA转染细胞36 h后，可降低端粒酶活性20%左右，而250 ng siRNA可降低75%左右。可见体外转录法能高效、快速、大量合成siRNA，针对hTERT及hTR基因的siRNA可明显降低Hut78细胞株的端粒酶活性。