结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶基因的克隆表达及酶学性质研究

2006年04月21日 中华结核和呼吸杂志 2005 Vol.28 No.12 P.845-848 2 （上海）为了获得具有生物学活性的结核分枝杆菌重组异柠檬酸裂解酶蛋白。研究者以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板，扩增该菌株的异柠檬酸裂解酶基因icl，克隆入原核表达载体pET-28a(+)中，通过在大肠杆菌BL21(DE3)中表达，获得以镍离子螯合型琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化的重组蛋白，并对其酶学性质进行测定分析。结果纯化出具有生物学活性的重组结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶.酶学性质测定分析表明，重组异柠檬酸裂解酶ICL的比活力为7.657×102 μmol·mg-1·min-1，反应最适pH值约为7.4。重组蛋白经高效液相色谱及质谱鉴定，测得相对分子质量为50 603.347。在5 mmol/L Tris-Cl缓冲液、pH值7.8、25 ℃条件下，重组ICL的二级结构中相对有43.8 %的α螺旋、31.9%的β折叠、3.4%β转角、20.9 %无规则卷曲。可见本研究成功克隆表达结核分枝杆菌H37Rv异柠檬酸裂解酶基因，酶学性质鉴定获得了具有生物学活性的重组蛋白，为该酶免疫学研究及新型抗结核药物的筛选奠定了基础。