pcDNA3.1(-)-hTGFβ3成纤维细胞稳定表达系统的构建与生长增殖活性研究

2006年05月24日 中华整形外科杂志2006 Vol.22 No.2 P.109-112 20 （汕头）为了构建人转化生长因子β3的真核表达载体pcDNA3.1(-)/TGFβ3转染NIH3T3成纤维细胞的稳定表达系统，研究转基因TGFβ3对成纤维细胞生长增殖活性的影响。研究者通过脂质体介导的转染技术和G418细胞筛选法，将真核表达载体pcDNA3.1(-)/TGFβ3质粒导入NIH3T3成纤维细胞，应用RT-PCR与Western blot检测hTGβ3在真核细胞中的表达。经相差显微镜形态观察及四唑蓝比色实验法(MTT)检测细胞增殖活性。结果在10株转染和经G418反复筛选的NIH3T3成纤维细胞系中，有7株hTGFβ3 mRNA及其蛋白的表达明显增强，其余3株细胞相对较弱或者没有表达。TGFβ3转基因稳定表达的NIH3T3成纤维细胞系的生长增殖明显减缓(P＜0.05)。可见pcDNA3.1(-)/TGFβ3真核表达载体转染NIH3T3成纤维细胞的稳定表达系统构建成功，转基因hTGFβ3在体外培养条件下可抑制成纤维细胞的增殖。