In-cell PCR技术扩增白癜风自身抗体基因

2006年06月02日 中华皮肤科杂志 2006 Vol.39 No.1 P.38-40 9 （西安）为了从白癜风患者外周血B淋巴细胞中扩增获得原始亲本配对的抗体基因。研究者以正常人的黑素细胞为抗原，用活细胞ELISA法筛选50例白癜风血清，选择其中7例抗黑素细胞膜抗体强阳性的患者外周血分离得到CD19+B淋巴细胞，以10%甲醛溶液固定，蛋白酶K溶液通透化处理，进行in-cell PCR。用特异性引物进行in-cell RT-PCR扩增人免疫球蛋白轻链和重链可变区基因，采用Cre/loxP系统在细胞内完成轻重链的连接，然后经巢式PCR扩增获得具有细胞内原始亲本配对特性的单链抗体基因。结果经in-cell PCR扩增，获得了与预期单链抗体大小一致的单一800 bp产物。可见利用in-cell PCR技术可以扩增白癜风原始亲本配对的自身抗体基因。