人脐静脉内皮细胞分离与冻存技术及Gore-Tex人工血管内皮化

2006年01月19日 中华胸心血管外科杂志 2005 Vol.21 No.5 P.282-285 16 （上海）为了体外分离人脐静脉内皮细胞，进行冷冻保存，并采用冻存脐静脉内皮细胞，复融后体外扩增培养，种植于Gore-Tex表面，进行人工血管内皮化。研究者脐静脉内灌注消化液分离内皮细胞，所获内皮细胞体外培养，经免疫荧光染色及扫描电镜检查，鉴定所获内皮细胞及其纯度；采用梯度降温法，冻存内皮细胞，经复苏后，进行形态学检查，以台酚蓝试验、四氮唑盐(MTT)试验、流式细胞术细胞凋亡检测等方法鉴定细胞生物特性；冻存脐静脉内皮细胞体外培养扩增后，种植于Gore-Tex材料上，并行扫描电镜观察。结果血管内灌注消化液法可获取高纯度的内皮细胞；与新鲜细胞相比，复苏的内皮细胞活力保持在95%以上,复苏后的内皮细胞HE染色及生长曲线与新鲜细胞差异无统计学意义。冻存内皮细胞的凋亡率较新鲜内皮细胞高，但无统计学差异。冻存内皮细胞成功种植于Gore-Tex材料上，细胞生长良好，覆盖于大部分Gore-Tex表面。可见冻存内皮细胞作为种子细胞对人工血管内皮化具有可行性。脐静脉灌注酶消化法可获取足够数量及纯度的内皮细胞。冻存的内皮细胞复苏后无明显形态学改变，并保持较高的活力及体外增殖能力，可作为种子细胞来源。