幽门螺杆菌hpaA核酸疫苗的构建及免疫原性检测

中华消化杂志2004 Vol.24 No.10 P.579-582

为了构建含幽门螺杆菌(Hp)hpaA基因的核酸疫苗，第二军医大学学者抽提Hp标准菌株CCUG17874基因组DNA,应用聚合酶链式反应(PCR)技术从基因组DNA扩增hpaA基因,克隆入pUCmT载体,检测hpaA基因序列,经过一系列酶切、连接反应将其克隆入真核表达载体pIRES,转入大肠杆菌,筛选阳性克隆,通过PCR和酶切反应鉴定。并将构建好的重组载体pIRES-hpaA转染COS-7细胞,SDS-PAGE及Western印迹法检测pIRES-hpaA表达HpaA蛋白的免疫原性。最终成功扩增出长约750 bp的hpaA基因,测序结果表明扩增出的hpaA基因与Hp hpaA序列一致,PCR和酶切鉴定结果证实hpaA基因克隆入真核表达载体pIRES,成功构建了含hpaA基因的Hp核酸疫苗pIRES-hpaA,并经Western印迹法检测到特异性蛋白条带。构建的hpaA基因的Hp核酸疫苗,为进一步探索其免疫作用奠定了基础。