质粒介导shRNA对心肌细胞kir2.1 蛋白表达和搏动频率的影响

2006年09月15日 中国胸心血管外科临床杂志 2006 Vol.13 No.1 P.28-31 11 （济南）为了构建抑制大鼠心肌细胞kir2.1基因的真核表达质粒pEGFP6-kir2.1，观察对大鼠心肌细胞kir2.1信使RNA(mRNA)、蛋白表达情况及搏动频率的影响。研究者选择5个针对大鼠心肌细胞kir2.1基因的RNA干扰(RNA mterference)位点，设计合成5对相应的寡核苷酸链，形成双链后依次将其连入带有U6启动子的载体，得到含5个目的基因的重组质粒pEGFP6-kir2.1。转染大鼠心肌细胞，并将其分为3组：实验组、阴性质粒对照组和空白对照组。转染后72h，用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法(Western-blotting)检测kir2.1mRNA和蛋白表达情况，并观察细胞搏动频率。结果转染后72h，实验组心肌细胞kir2.1 mRNA和蛋白表达明显低于两对照组(P＜0.01)，两对照组间比较差别无统计学意义；实验组搏动频率增加，并显著高于两对照组(P＜0.01)，两对照组之间搏动频率差别无统计学意义。可见真核表达质粒pEGFP6-kir2.1能明显抑制大鼠kir2.1基因的表达，提高大鼠心肌细胞的自律性。