RNA干扰技术抑制人恶性黑素瘤细胞A375中淋巴样增强因子mRNA及蛋白表达

2006年08月25日 中华皮肤科杂志 2006 Vol.39 No.4 P.200-203 12 （西安）为了利用RNA干扰技术，以淋巴样增强因子(LEF-1)为靶基因，设计、构建重组体，研究其对人恶性黑素瘤细胞A375中LEF-1表达的抑制作用。研究者设计、合成针对LEF-1 mRNA序列的有小发夹结构的正义和反义寡核苷酸，退火后与表达载体Psilencer3.1-H1 neo相连接，经鉴定正确后转染人恶性黑素瘤细胞A375，以G418筛选，获得稳定转染细胞株，分别以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)和免疫细胞化学方法检测转染细胞中LEF-1 mRNA及蛋白表达水平的改变。结果成功构建了靶向人LEF-1基因的siRNA表达载体，获得稳定转染细胞株，转染细胞LEF-1 mRNA及蛋白水平明显下调。可见靶向LEF-1的RNA干扰重组体可抑制人恶性黑素瘤细胞A375中LEF-1表达。