复制缺陷型腺病毒Ad-p14ARF治疗肝细胞癌的实验研究及作用机制的探讨

2007年04月13日 中华肿瘤杂志 2006 Vol.28 No.9 P.641-645 8 （北京）为了研究复制缺陷型重组腺病毒Ad-p14ARF用于肿瘤基因治疗的可行性及其作用机制。研究者利用Ad-Easy系统构建并扩增了Ad-p14ARF复制缺陷型腺病毒；应用台盼蓝细胞计数法和倒置相差显微镜观察Ad-p14ARF对肝癌细胞的生长抑制作用；AnnexinV/PI双染法结合流式细胞仪检测不同滴度的Ad-p14ARF作用后肝癌细胞的凋亡情况；Western blot法检测相关蛋白的表达情况，构建皮下肝癌移植瘤裸鼠模型，研究Ad-p14ARF在体内的抑瘤活性。结果 Ad-p14ARF可以明显抑制野生型p53和突变型p53表型的肝癌细胞增殖、生长。Annexin V/PI双染色法显示，Ad-p14ARF能促进肝癌细胞株HepG2和BEL7402的细胞凋亡，凋亡细胞比例与腺病毒滴度呈现一定的剂量相关性。凋亡相关蛋白检测提示，Ad-p14ARF能上调p53下游基因Bax、p21的表达。体内抑瘤试验显示，Ad-ECRG2可以明显抑制肝癌细胞BEL7402裸鼠移植瘤的生长。可见 p14ARF基因的导入可以通过p53依赖和非依赖途径抑制肿瘤细胞增殖，促进肿瘤细胞凋亡，有望在恶性肿瘤的基因治疗中发挥重要作用。