凝胶色谱法测定头孢替唑钠的聚合物

摘要: 目的　建立凝胶色谱法测定头孢替唑钠的聚合物的方法。方法　采用葡聚糖凝胶Pharmadex G-10 柱(16mm ×33cm ) , 流动相: A:011mo l/L 磷酸盐缓冲液(pH7.0) ,B: 水。流速为1.0m l/m in; 检测波长为254nm, 进样量为200uL。结果　头孢替唑钠在6.696～ 29.54mg/mL范围内, 浓度与聚合物的峰面积呈良好线性关系( r= 0.9986)。结论　该方法简便, 准确, 重现性好。
关键词: 凝胶色谱法; 头孢替唑钠; 聚合物

    B-内酰胺类抗生素过敏反应与药物中存在的高分子杂质有关, 所以对抗菌药物中高分子杂质进行控制有重要意义。中国药典2000 年版二部中对头孢他啶, 头孢曲松和头孢哌酮等都制定了聚合物的指标。头孢替唑钠属B-内酰胺类抗生素, 对其聚合物的测定未见文献报道。本文利用葡聚糖凝胶Pharm adex G-10 凝胶色谱系统实现了对头孢替唑钠中高分子聚合物的分离分析。
1　仪器和试药
    Am ersham B io sciences A KTA p rim e 抗生素高分子杂质仪, 头孢替唑钠对照品(纯度为8718% ) 由韩国SH IN POON G PHARM CO -L TD 提供试剂磷酸氢二钠, 磷酸二氢钠(分析纯) 水为双蒸水。样品头孢替唑钠(批号为030312、030402、030403) 由天津新丰制药有限公司生产。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　色谱柱: 葡聚糖凝胶Pharm adexG-10 柱(16mm ×33cm ) , 流动相: 0.1mo l/L磷酸盐缓冲液(取磷酸氢二钠23.9g, 磷酸二氢钠5.4g,用水稀释成1000mL , 调节pH7.0), 流速: 1.0m /m in; 检测波长为254nm , 进样量为200uL。用流动相A 为流动相, 1.0m g/m in蓝色葡聚糖2000 进行测定, 理论板数为3800。
2.2　溶液的配制
2.2.1　对照品溶液: 取头孢替唑钠对照品约20m g,精密称定, 置100mL 容量瓶中, 用水溶解并稀释至刻度, 摇匀。精密量取10mL 置50mL 容量瓶中, 用水稀释至刻度, 摇匀。
2.2.2　供试品溶液: 取头孢替唑钠约0.2g, 精密称定, 置10mL 容量瓶中, 加流动相A 溶解并稀释至刻度, 摇匀, 立即进样(见图1)。
2.3　线性范围
2.3.1　头孢替唑钠对照品测定的线性范围: 精密称取头孢替唑钠对照品31.68m g, 置100mL 容量瓶中, 用水溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为贮备液。分别吸取1, 2, 3, 5, 10mL 置25mL 容量瓶中, 用水稀释至刻度。将此5 种溶液和贮备液分别进样200uL。对照品浓度在11.13～ 278.2ug/mL范围内对峰面积呈良好线性, 相关系数0.9999。
2.3.2　高分子聚合物峰的线性范围: 取同一批样品, 分别称取不同量配制成不同浓度的供试液, 进样200uL 测定聚合物的峰面积。以头孢替唑钠高分子聚合物的峰面积为纵坐标, 浓度(m g/mL) 为横坐标, 求得回归方程: Y = 0.188548281X –0.106049981, r= 0.9986。结果供试液浓度在6.696～ 29.54m g/mL范围内对聚合物的峰面积呈良好线性关系。
2.4　缔合峰的重现性　取对照品溶液, 重复进样5次, 记录缔合峰峰面积。RSD 为1.1%。
2.5　高分子聚合物测定的重现性　取同一批样品约0.2g5 份, 精密称定, 置10mL 的容量瓶中。加流动相A 溶解并稀释至刻度, 分别进样, 记录聚合物的峰面积。RSD 为2.46%。
2.6　影响色谱行为的因素的考察
2.6.1　流动相A 的pH 值　头孢替唑钠供试液分别以pH6.0, pH7.0, pH8.0 3 种磷酸盐缓冲液洗脱时, 聚合物的分离情况以pH7.0 时较好。
2.6.2 　流动相A 中磷酸酸盐浓度　分别以0.05mo l/L, 0.1mo l/L, 0.2mo l/L3 种浓度的pH7.0 磷酸盐缓冲液为流动相洗脱时, 聚合物的分离情况以0.1mo l·L - 1浓度时较好。
2.7　样品测定　取供试品约0.2g, 精密称定, 置10mL 容量瓶中, 加流动相A 溶解并稀释至刻度, 摇匀, 立即取200uL 注入色谱仪, 以流动相A 为流动相进行测定, 记录色谱图; 另取对照品溶液200uL 注入色谱仪, 以流动相B 为流动相进行测定, 记录色谱图, 按外标法计算, 测定结果3 批样品( 030312、030402、030403) 聚合物含量分别为0.0020%、
0.012%、0.017%。
3　讨论
3.1　实验表明, 随着在储存中吸收水分的增加, 样品的聚合物含量增加。
3.2　根据在特定条件下, B-内酰胺类抗生素可以缔合形成分子量较大的缔合物, 缔合物在Pharm adexG-10 凝胶色谱系统中和高分子杂质一样, 都在Kav= 0 处表现为单一的色谱峰的特点, 本文用自身对照外标法对聚合物峰进行定量。

参考文献
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〔2〕国家药典委员会编1 中华人民共和国药典〔J 〕1 北京: 化学工业出版社, 2000 年版, 二部〔S〕, 1871
〔3〕胡昌勤编1 高效液相色谱法在抗生素质控分析中的应用(下册)〔M〕1 北京: 气象出版社, 2001, 176～ 2041