高效液相色谱法测定虎杖中大黄素的含量

    虎杖收载于《中国药典》2000年版一部，采用分光光度法测定总葸醌控制含量。虎杖含蒽醌类衍生物，以游离型为主，有大黄素、大黄素甲醚、大黄酚等成分⋯，本文采用高效液相色谱法测定虎杖药材中大黄素的含量，方法快速、方便、可靠。
1 仪器与试药
    Agilent 1100型组合式全自动高效液相色谱仪。虎杖药材(市售)，大黄素对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用)，甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
2 方法和结果
2．1 色谱条件
    色谱柱：Kromasil C18(250mm×4.6mm，5μm)，流动相：甲醇-0.1％磷酸溶液(85:15)，流速：1．0mlmin，柱温：室温，测定波长：254nm，用外标法检测，进样量：5．OμL。
2．2 供试品溶液的制备
    取本品粉末(过三号筛)约0．5g(同时另取本品粉末在105℃测定干燥失重)，精密称定，置100ml容量瓶中，加甲醇约80ml，超声处理(功率250W，频率30kHz)30min，放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置100ml圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2．5mol/L 硫酸溶液20ml，加热回流1h，冷却，加氯仿30nIl，继续回流2h，分取氯仿层，酸液用氯仿提取3次，每次5ml，合并氯仿提取液，通过装有无水硫酸钠的漏斗，置50ml容量瓶中，滤器用少量氯仿洗涤，洗液并人滤液中，加氯仿至刻度，摇匀，精密量取氯仿液10ml，水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，置25ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2．3 对照品溶液的制备
    精密称取大黄素对照品9．81mg，置100ml容量瓶中，加甲醇适量使溶解，并加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品储备液(浓度为0．0981mg/ml )。精密量取lml，加甲醇稀释至25ml，作为对照品溶液。
2．4 线性关系考察
    将上述大黄素对照品溶液，分别进样2．0μL、4．0μL、6．0μL、8．0μL、10.0μL、12．0μL。记录峰面积，以峰面积(Y)对进样量(X)作图，得标准曲线，计算回归方程：Y=4．0387×103X一0．844，r= 0．9999，线性范围为7．848×10-3～4．709×10-2.
2．5 精密度试验
    取同一供试品溶液，重复进样6次，记录峰面积，结果RSD为0．2％ ，表明精密度良好。
2．6 重复性试验
    取同一批虎杖样品5份，按上述方法测定大黄素的含量，结果RSD为0．5％。
2．7 溶液稳定性试验
    取“2．6”项下供试品溶液，在0，4，8，12，16，20，24h分别进样5μL，记录峰面积，结果峰面积的RSD为0．9％，表明供试品溶液在24h内均稳定。
2．8 回收率试验
    精密称取已知含量为1．6％样品适量，分别精密加入大黄素对照品储备液15ml，按上述方法测定，计算加样回收率。
2．9 样品测定
    取虎杖药材按上述方法测定样品中大黄素的含量，结果见表2。将对照品溶液、供试品溶液分别进样sva，依本法测定，样品和对照品在同一保留时间位置上有一相应的色谱峰。
3 讨论
    取大黄素对照品溶液，在200～400nm波长范围内进行扫描，结果显示在219nm、254nm、292nm处均有最大吸收峰，由于254nm处的吸收度较强且不受溶剂峰干扰，故选择254nm作为测定吸收波长，与《中国药典》规定一致。
    实验表明，本品经水解后再用氯仿提取4次，大黄素已基本提取完全。
    从线性、回收率、重现性、溶液稳定性等试验结果可以看出，用HPLC法测定虎杖中大黄素的含量，准确性高，重现性好，且操作简便快速。

参考文献：
[1] 中国医学科学院药物研究所等编．中药志[M]．北京：人民卫生出版社，1979：441
[2] 中国药典[S]．一部，2000：18