高效液相色谱法测定抗病毒药物口罩中利巴韦林的含量

摘要：目的：建立抗病毒药物口罩中利巴韦林的测定方法。方法：采用高效液相色谱法。Kromasil C18柱(5μm，4.6mm×250mm)；水为流动相，流速lmL/min，检测波长207nm。结果利巴韦林在2O～lO0μg/mL内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，r=O.9998，平均回收率为102.6％(RSD=O.86％，n=6)。结论该方法可用于抗病毒药物口罩的质量控制。
关键词：高效液相色谱法；利巴韦林；口罩
抗病毒药物口罩是我军区医疗机构自制的预防“非典”的医疗防护用品，其含药湿巾中含有的利巴韦林(ribavirin，三氮唑核苷，病毒唑)，为一具有抑制病毒活性的合成核苷酸类衍生物，是防治“非典”推荐用药。本实验参照中国药典利巴韦林含量测定方法 采用HPLC法测定抗病毒药物口罩中利巴韦林含量，可有效地分离杂质，方法简便、灵敏、快速，可用于抗病毒药物口罩的质量控制。
1 仪器与试药
岛津LC-6A型高效液相色谱仪；岛津SPD-6AV型紫外-可见检测器；岛津C-R4A数据处理机。利巴韦林对照品(中国药品生物制品检定所，批号：629—200001)，抗病毒药物口罩(医疗机构自制，批号：20030418-1，20030418-2，20030418-3)。
2 方法与结果
2．1 色谱条件
色谱柱：Kromasil Cl8柱(5μm，4.6mm×250mm)，流动相：水，流速：1mL/min，检测波长：207nm。理论塔板数按利巴韦林计算，应不低于2500。定量方法：外标法。在上述条件下，利巴韦林色谱峰与样品中的杂质色谱峰达到了基线分离，证明此分离条件可行。
2．2 标准曲线的绘制
精密称取经105℃干燥至恒重的利巴韦林对照品50mg置lOOmL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。精密量取上述溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.OmL，分别置5OmL量瓶中，各加水稀释至刻度，摇匀。分别进样20μL，记录峰面积，以峰面积为纵坐标、浓度为横坐标作线性回归，结果利巴韦林在2O～100μg/mL 浓度范围内峰面积与浓度(μg/mL )呈良好线性关系，回归方程为Y=16300.2+387392.3X，相关系数r=0.9998。
2．3 精密度试验
分别将浓度为50μg/mL 的利巴韦林对照品溶液连续进样6次，每次进样20μL，每次间隔30min，所得峰面积的RSD为0.98％(n=6)，表明本方法的精密度较好。
2．4 重复性试验
取同批号的样品5份，分别按样品测定项下方法进行测定，求得平均含量为104.3％ ，计算RSD为1.O％(n=5)，说明本方法重复性较好。
2．5 回收率试验
精密量取浓度为165μg/mL 利巴韦林对照品溶液5.0，8.0，11.0mL，分别加入各放有1片已测定含利巴韦林为
1299μg／片含药湿巾塑袋中，把加入药物的含药湿巾分别置小烧杯中，各剪成小的碎片，加适量水浸泡并超声处理，洗液定量转移至50mL量瓶中，把碎湿巾用少量水洗涤3次，合并洗液定量转移至50mL量瓶中，装湿巾的塑料袋用少量水洗涤，洗液亦转移至定量瓶中，然后加水至刻度，摇匀，过滤后再稀释1倍。照样品测定项下方法测定，平均回收率为102.0％(RSD=0.87％，n=6)。结果表明本方法回收率好，方法可行。
2．6 空白试验
取缺利巴韦林药物的湿巾1个，然后按样品测定项下操作，进行分析，记录色谱图。结果表明湿巾中的辅料对主药的测定无干扰。
2．7 样品测定
精密称取经105oC干燥至恒重的利巴韦林对照品5mg置lOOmL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度制成50μg/mL的对照品溶液。取抗病毒药物口罩含药湿巾1个，剪成小的碎片，置小烧杯中，加适量水浸泡并超声处理，洗液定量转移至lOOmL量瓶中，把碎湿巾用少量水洗涤3次，装湿巾的塑料袋用少量水洗涤，合并洗液亦转移至lOOmL量瓶中，然后加水至刻度，摇匀，过滤，制成供试品溶液。分别取对照品溶液和供试品溶液各20μL注入液相色谱仪，记录色谱图；按外标法以峰面积计算利巴韦林的含量。3批样品测定结果分别为104.4％，103.9％，103.5％。
3 讨论
3．1 流动相选择
选用水作流动相，流速为1mL/min，利巴韦林的出峰时间约为7min，可与杂质峰完全分离，具有价格低廉，安全无毒性、无污染等优点。
3．2 溶液稳定性考察
对供试品溶液和对照品溶液进行了0～lOh的稳定性考察，对其在lOh内每隔2h重复进样，共进样6次，测定值基本稳定，RSD为1.39％和1.11％。
4 结论
该方法简便、易行、可靠，可用于抗病毒药物口罩的质量控制。