摘要 目的：建立涵水胶囊中吴茱萸次碱的高效液相色谱测定方法。方法：Waters Symmetry Shield RP18分析柱(3.9mm x 150mm，5μm)，柱温40℃，流动相为乙腈-水(36：62)，检测波长为345nm，流速为1.0mL／min。结果：吴茱萸次碱在0.52—2.6μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 5)．平均回收率为102.1％，RSD=1.7％ 。结论：高效液相色谱法简便、灵敏、准确、重现性好，可用于控制涵水胶囊的质量。
关键词:涵水胶囊；吴茱萸次碱；高效液相色谱法
涵水胶囊由桑寄生、吴茱萸、赤芍等
中药组成，是治疗
高血压的有效方剂，方中吴茱萸含有效成分吴茱萸次碱和吴茱萸胺。为控制产品内在质量，应对其所含吴茱萸次碱进行含量测定。吴茱萸药材中吴茱萸次碱含量测定方法有薄层扫描法⋯和高效液相色谱法(HPLC法)。笔者以HPLC法对涵水胶囊中吴茱萸次碱的含量进行了测定，获得了理想的结果。
1 仪器与试药
Waters高效液相色谱仪(美国Waters)，2487紫外检测器(美国Waters)，2996二极管阵列检测器(美国Waters)，Empower数据处理系统；KQ-600DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；FA1004型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)。
吴茱萸次碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号：0801-9702)；乙腈(色谱纯，天津科密欧化学试剂开发中心，批号：20030601)；涵水胶囊(本中心提供)；重蒸馏水(自制)；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2．1 色谱条件
色谱柱：Waters Symmetry Shield RP18分析柱(3.9mm×150mm，5μm)，Waters Symmetry Shield RP18保护柱(3.9mm x 20mm，5μm)；流动相：乙腈-水(38：62)；柱温：40℃；流量：lmL／min；检测波长：345 nm。理论板数按吴茱萸次碱峰计算不低于8000。
2．2 标准曲线制备
精密称取吴茱萸次碱对照品1.3mg，用甲醇定容于10mL量瓶，作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液4，8，12，16，20μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。以进样量为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归。回归方程为y=13 230440X+964100.3，r=0.9995，表明吴茱萸次碱进样量在0.52—2.6μg范围内与峰面积线性关系良好。
2．3 供试品溶液制备
取涵水胶囊内容物(研细)0.2g，精密称定后，置5mL量瓶中，加甲醇4.5mL，超声45min，甲醇定容，摇匀，静置，取上清液过微孔滤膜，取续滤液为供试品溶液。
2、4 阴性对照试验
取除吴茱萸外的其他处方药物，按相同的
制剂工艺制成阴性对照品，取适量按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照品溶液，取20μL进样测定。结果表明阴性对照品溶液在吴茱萸次碱保留时间位置无干扰。
2．5 精密度试验
取对照品溶液(0.13mg／mL)，重复进样5次，每次20μL，以峰面积计算其精密度。结果吴茱萸次碱峰面积平均值为37551674.9，RSD为0.9％ ，表明方法精密度良好。
2．6 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液20μL，分别于0，1，3，6，9，12h进样，记录峰面积。结果RSD=1.0％，表明吴茱萸次碱在12h内稳定。
2．7 重复性试验
取同一批样品5份，按供试品溶液的制备方法，制备5份供试品溶液，分别以20μL进样，测定吴茱萸次碱的含量。结果其RSD为1.4％，表明方法重复性良好。
2 8 加样回收率试验
取适量已知含量的同一批涵水胶囊内容物5份，精密称定，加入适量对照品溶液，按照供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，取20μL进样，测定。
2 9 样品含量测定
取3批涵水胶囊，按照供试品溶液的制备方法，制备供试品溶液，取20μL进样，测其含量。
3 讨论
3．1 文献报道吴茱萸次碱的测定波长为290，225，280，254nm。经二极管阵列检测器光谱扫描，其最大吸收波长为343nm，故最终确定检测波长为345nm。
3．2 关于流动相的选择，曾试验了甲醇-水、甲醇-磷酸、乙腈-磷酸，结果甲醇-水分离不理想。另有报道 ，流动相pH值对吴茱萸生物碱的测定影响不大，但笔者用甲醇-磷酸、乙腈-磷酸作流动相却没检测到吴茱萸次碱的吸收峰(使用0.2％磷酸水，pH=3)，说明酸性较强时对吴茱萸次碱的影响很大。
3．3 供试品溶液的提取，加甲醇超声30min即可提取完全。由于本供试品溶液还用于其他成分测定，故选择提取45min，且对含量无影响。
参考文献：
[1]吴 清，赵志群，杜守颖．小儿腹泻贴膏剂中吴茱萸碱及次碱的含量测定[J]．中国实验方剂学杂志，1997，3(3)：13—14．
[2]徐艳春，魏璐雪，周玉新，等．高效液相法测定黄连与吴茱萸配伍前后吴茱萸碱及吴茱萸次碱的含量[J]．中国中药杂志，2001，26(1 2)：846—847．
作者：
2007-5-18