中药注射剂乳源康有效成分含量的高效液相色谱测定

摘要：以隐丹参酮为标示物，用Waters 486型高效液相系统．Kromasil 18(5μm)4.6mm×25Omm色谱柱对中药注射剂乳源康含量进行了测定。结果表明。以峰高(H)对药物浓度(C)进行回归，求得标准曲线C=0.0005H一0.9835，线性相关系数R2=0.9989。证实所建立的HPLC方法在产品含量范围内测定性好，准确率高，便于操作，对乳源康的含量测定和产品质量控制具有重要意义。
关键词：乳源康；隐丹参酮；高效液相色谱法；含量测定
乳源康(复方连丹注射液)由甘肃丹参、连翘、双花、黄连等中草药经提取、分离和纯化，收集具有抗菌和消炎活性的单个化合物以及理化性质和生物活性相近的化学成分组成，主要用于乳牛乳腺炎和家畜其他敏感性病原菌引起的感染性疾病的治疗。药理、药效研究表明，乳源康临床应用具有高效、安全、毒性小、使用方便、无抗生素残留的优点，对于解决乳制品中抗生素类药物的残留有重要意义。
本试验通过对乳源康的有效成分进行定量测定．用丹参中所含隐丹参酮作为有效成分测定的标示物，建立了用于质量控制和含量测定的高效液相色谱法(HPLC)。
l 材料与方法
1．1 药品与试剂
乳源康，由甘肃丹参等中草药的提取分离物组成，其中含丹参2O～27μg／mL(以隐丹参酮计)，连翘脂溶性提取物50μg／mL，黄连水溶性提取物25μg／mL，双花水溶性提取物25μg／mL．均由本实验室制备，批号20030901。氯仿(分析纯)、甲醇(色谱纯)以及其他试剂购自甘肃省化学试剂采购供应站。隐丹参酮标准品购自中国药品生物制品鉴定所。
1．2 高效液相系统 
Waters高效液相色谱仪系列，Kromasil C18(5μm)4.6mm×250mm 色谱柱，Waters510型输液泵，480型紫外检测器，U6K 型进样阀，AST型数据处理仪，3800型打印机。流动相为V(甲醇)：V(水)=80：20，检测波长为254 nm，柱温25℃，该条件下隐丹参酮的保留时间(t g)为11.14min，洗脱时间为25min。理论板数按隐丹参酮计算大于2 000。
1．3 测定方法
取药品试样1mL，加2mL氯仿提取3次，合并氯仿液，用氮气吹干，以1mL甲醇溶解并定容。取供试液10μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图，将所得图谱的峰高代入标准曲线求得本品的含量。同时进行方法的精密度和回收率试验。
2 结果
2．1 HPLC测定
乳源康含量测定的高效液相色谱吸收图谱。色谱峰保留时间为l1.44min时出现隐丹参酮吸收峰，在l1.44～18.08 min内出现的5个吸收峰为丹参成分，其他吸收峰为乳源康中的其他成分。从中可看出，用隐丹参酮作为乳源康含量测定的标示物，无论从分离程度还是相对含量上均是可行的。
2．2 标准曲线
对照品标准曲线的绘制：精密称取15mg隐丹参酮，用甲醇配成3000μg／mL的工作液，然后以此工作液分别配制成10、20、40、60、80和120μg／mL的甲醇标准液，以峰高(H)对药物浓度(C)进行回归，求得标准曲线C===0.000 5H一0.9835，其线性相关系数R2=0.9989。
按照所建方法进行样品的含量测定．乳源康含量以隐丹参酮标示．含量应为2Oμg／mL。测定值为标示量的9O%～l1O%。
2．3 精密度试验
分别配制含隐丹参酮10.0、20.0、40.0、60.0和80.0μg／mL的标准试样，每个浓度4个样品，共测4批，分别计算批内和批间变异系数。结果表明，测定精密度在允许范围内。
2．4 回收率试验
分别配制含20.0、40.0和60.0μg／mL隐丹参酮的标准试样，按照所建立的HPLC法测定，结果回收率分别为120.5%、96.4%、96.9%，平均回收率为104.6%。
3 讨论
乳源康中大部分中草药的有效成分含量已经做到了定量化，选择特定的化合物作为标示物进行药物含量测定是可行的，并能够对药品质量进行有效控制。甘肃丹参是乳源康中的主要有效成分之一，其中所含的隐丹参酮为含量最高的有效单体，因此，本研究将其选定为测定标示物。经高效液相色谱检测，以隐丹参酮作为含量测定标示物，在隐丹参酮含量为10～80μg／mL范围内，线性相关良好，测定精密度高，可以准确测定。本试验建立的测定方法已经作为乳源康质量标准被采用。
中药标准对于保证中药产品的安全稳定、质量控制具有重要意义。传统中药品种质量标准的提升工作已成为当前中药研究的热点。中药质量标准正在由以单成分、单指标的质量控制向多成分、多指标以及定量化的质量控制转变。乳源康虽然可以进行多成分的定量测定，但原药材及其有效成分的制备和在生产过程中存在的可变性因素，使多成分测定对乳源康质量标准的可控制性还具有一定难度。为此，对其主要成分建立了定性的检测指标。乳源康质量控制的研究，将对产品的完善和尽快推向临床应用起到积极作用。
[l] 张继瑜，李建勇，周绪正，等．中药注射剂乳源康的毒理药理学研究[J]．中兽医医药杂志，2004，专集：22—25．
摘要：以隐丹参酮为标示物，用Waters 486型高效液相系统．Kromasil 18(5μm)4.6mm×25Omm色谱柱对中药注射剂乳源康含量进行了测定。结果表明。以峰高(H)对药物浓度(C)进行回归，求得标准曲线C=0.0005H一0.9835，线性相关系数R2=0.9989。证实所建立的HPLC方法在产品含量范围内测定性好，准确率高，便于操作，对乳源康的含量测定和产品质量控制具有重要意义。
关键词：乳源康；隐丹参酮；高效液相色谱法；含量测定
乳源康(复方连丹注射液)由甘肃丹参、连翘、双花、黄连等中草药经提取、分离和纯化，收集具有抗菌和消炎活性的单个化合物以及理化性质和生物活性相近的化学成分组成，主要用于乳牛乳腺炎和家畜其他敏感性病原菌引起的感染性疾病的治疗。药理、药效研究表明，乳源康临床应用具有高效、安全、毒性小、使用方便、无抗生素残留的优点，对于解决乳制品中抗生素类药物的残留有重要意义。
本试验通过对乳源康的有效成分进行定量测定．用丹参中所含隐丹参酮作为有效成分测定的标示物，建立了用于质量控制和含量测定的高效液相色谱法(HPLC)。
l 材料与方法
1．1 药品与试剂
乳源康，由甘肃丹参等中草药的提取分离物组成，其中含丹参2O～27μg／mL(以隐丹参酮计)，连翘脂溶性提取物50μg／mL，黄连水溶性提取物25μg／mL，双花水溶性提取物25μg／mL．均由本实验室制备，批号20030901。氯仿(分析纯)、甲醇(色谱纯)以及其他试剂购自甘肃省化学试剂采购供应站。隐丹参酮标准品购自中国药品生物制品鉴定所。
1．2 高效液相系统 
Waters高效液相色谱仪系列，Kromasil C18(5μm)4.6mm×250mm 色谱柱，Waters510型输液泵，480型紫外检测器，U6K 型进样阀，AST型数据处理仪，3800型打印机。流动相为V(甲醇)：V(水)=80：20，检测波长为254 nm，柱温25℃，该条件下隐丹参酮的保留时间(t g)为11.14min，洗脱时间为25min。理论板数按隐丹参酮计算大于2 000。
1．3 测定方法
取药品试样1mL，加2mL氯仿提取3次，合并氯仿液，用氮气吹干，以1mL甲醇溶解并定容。取供试液10μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图，将所得图谱的峰高代入标准曲线求得本品的含量。同时进行方法的精密度和回收率试验。
2 结果
2．1 HPLC测定
乳源康含量测定的高效液相色谱吸收图谱。色谱峰保留时间为l1.44min时出现隐丹参酮吸收峰，在l1.44～18.08 min内出现的5个吸收峰为丹参成分，其他吸收峰为乳源康中的其他成分。从中可看出，用隐丹参酮作为乳源康含量测定的标示物，无论从分离程度还是相对含量上均是可行的。
2．2 标准曲线
对照品标准曲线的绘制：精密称取15mg隐丹参酮，用甲醇配成3000μg／mL的工作液，然后以此工作液分别配制成10、20、40、60、80和120μg／mL的甲醇标准液，以峰高(H)对药物浓度(C)进行回归，求得标准曲线C===0.000 5H一0.9835，其线性相关系数R2=0.9989。
按照所建方法进行样品的含量测定．乳源康含量以隐丹参酮标示．含量应为2Oμg／mL。测定值为标示量的9O%～l1O%。
2．3 精密度试验
分别配制含隐丹参酮10.0、20.0、40.0、60.0和80.0μg／mL的标准试样，每个浓度4个样品，共测4批，分别计算批内和批间变异系数。结果表明，测定精密度在允许范围内。
2．4 回收率试验
分别配制含20.0、40.0和60.0μg／mL隐丹参酮的标准试样，按照所建立的HPLC法测定，结果回收率分别为120.5%、96.4%、96.9%，平均回收率为104.6%。
3 讨论
乳源康中大部分中草药的有效成分含量已经做到了定量化，选择特定的化合物作为标示物进行药物含量测定是可行的，并能够对药品质量进行有效控制。甘肃丹参是乳源康中的主要有效成分之一，其中所含的隐丹参酮为含量最高的有效单体，因此，本研究将其选定为测定标示物。经高效液相色谱检测，以隐丹参酮作为含量测定标示物，在隐丹参酮含量为10～80μg／mL范围内，线性相关良好，测定精密度高，可以准确测定。本试验建立的测定方法已经作为乳源康质量标准被采用。
中药标准对于保证中药产品的安全稳定、质量控制具有重要意义。传统中药品种质量标准的提升工作已成为当前中药研究的热点。中药质量标准正在由以单成分、单指标的质量控制向多成分、多指标以及定量化的质量控制转变。乳源康虽然可以进行多成分的定量测定，但原药材及其有效成分的制备和在生产过程中存在的可变性因素，使多成分测定对乳源康质量标准的可控制性还具有一定难度。为此，对其主要成分建立了定性的检测指标。乳源康质量控制的研究，将对产品的完善和尽快推向临床应用起到积极作用。
[l] 张继瑜，李建勇，周绪正，等．中药注射剂乳源康的毒理药理学研究[J]．中兽医医药杂志，2004，专集：22—25．