关键词：银黄灌洗液；盐酸小檗碱；含量测定；HPLC法
银黄灌洗液系列是本院自行研制的纯
中药制剂，用于治疗骨科病人的化脓性骨关节感染，替代抗生素治疗，具有疗效好、安全、经济、无毒副作用等优点。银黄灌洗液Ⅱ由黄连、黄柏、黄芩、山栀子等原材料经现代提取工艺精制而成。黄连、黄柏在此处方中为主药，其主要有效成分属小檗碱化合物，具有泻火解毒、抗菌等方面的药理活性。本实验参考有关文献，建立HPLC法测定银黄灌洗液Ⅱ中盐酸小檗碱含量的方法，用于其质量控制。
1 仪器
日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10A检测器，N2000工作站，CT0-10S柱温箱；水为去离子重蒸水，乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯；盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所。编号110715．200212，供含量测定用)；银黄灌洗液Ⅱ由本室提供。
2 方法与结果
2．1 色谱条件 色谱柱：PhenomenesC18柱(250mmX4.6mm，5μm)。流动相：0.02 mol／L磷酸二氢钾溶液-乙腈(70：30，用磷酸调pH为2.5)。流速：1.0 mL／分钟。检测波长：346nm。柱温：30℃。理论塔板数盐酸小檗碱峰计算应不低于3000。
2．2 系统适用性试验 在本色谱条件下，供试品中盐酸小檗碱成分得到较好分离，其色谱峰的保留时间与对照品一致。阴性试样未见盐酸小檗碱色谱峰。
2．3 线性关系 精密称取盐酸小檗碱对照品10mg，置50mL容量瓶中，用甲醇定容。精密吸取5mL至50mL容量瓶中，甲醇定容。得0.02mg／mL溶液。取此溶液12、10、8、6、4μL分别进样，得线性方程Y=2701058X一6255，r=0.999 9。盐酸小檗碱含量在0.08-0.24μg线性关系良好。
2．4 供试品溶液的制备 精密吸取本品5mL置50mL容量瓶中。甲醇定容，精密吸取5mL至50mL容量瓶中，加甲醇-盐酸(100：1)约20mL，60℃水浴加热15分钟，取出，超声处理30分钟。加甲醇至刻度，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。
2．5 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液10μL，重复进样5次，以盐酸小檗碱峰面积计算，其RSD为0.89％。
2．6 稳定性试验 取供试品溶液按上述条件分别在2、8、16、24、48小时进样，峰面积的RSD为1.2％ 。
2．7 重现性试验 精密量取同一供试品5份。按含量测定方法测定盐酸小檗碱含量，RSD为1.9％。结果表明本方法重复性良好。
2．8 回收率测定 精取已知含量的样品。添加一定量的盐酸小檗碱对照品，平行测定5次，平均回收率为99.2％。RSD为1.8％。
2．9 样品测定 取上述供试品溶液，进样10μL，在上述色谱条件下，采用标准曲线法测定盐酸小檗碱的含量。测得3批结果分别为：1.46、1.38、1.43mg／mL（n=3）。
3 讨论
(1)测得本品含量取平均值为1.42mg／mL。定含量下限为85.0％，计算得1.20mg／mL。故可暂定本品每1mL以盐酸小檗碱计，不得低于1.20mg／mL。
(2)本实验选用多种流动相，但0.02mol／mL磷酸二氢钾-乙腈(70：30)效果比较好，制剂中其它成分不产生干扰，与杂质峰得到良好分离。
(3)测定结果表明，本法具有回收率好，精密度、重现性高，样品处理简便，分析快速的优点。可用于中药制剂的质量控制。
参考文献
[1]卫生部药典委员会．中国药典(一部)[M]．北京：化工出版社，2000
[2]陈发奎．常用中草药有效成分含量测定[M]．北京：人民卫生出版社。1997．639
作者：
2007-5-18