【摘要】 目的建立高效液相色谱法测定血清中丙戊酸浓度。方法血清用正己烷提取，经α-溴苯乙酮衍生后浓缩进样。结果：丙戊酸的线性范围为1.76～176.0μg／ml。平均回收率大于97％。日内及日间RSD小于5％。结论：本法快速、简便、准确。可应用于
临床丙戊酸血药浓度测定。
【关键词】 高效液相色谱法；丙戊酸；柱前衍生法
丙戊酸(Valproic acid)在临床常用于抗癫痫治疗，由于个体差异较大。血药浓度过高对肝脏有损害。因此，有必要对体内血药浓度进行监测。由于丙戊酸在紫外区无特征吸收，故本法采用柱前衍生化，用α-溴苯乙酮将丙戊酸衍生化。生成苯甲酰甲基丙戊酸，在紫外区有特征吸收，用高效液相色谱法测定。本法已用于临床血药浓度测定。
1 实验方法
1．1 药品与试剂丙戊酸钠对照品(来源：中国药品生物制品检定所；含量：99.8％)；正庚酸；a-溴苯乙酮；正己烷；硫酸；三乙胺，异丙醇；甲醇及乙腈为色谱纯；重蒸馏水。
1．2 仪器与色谱条件美国Beckman公司HPLC
仪(125双泵，166检测器)，分析柱为Ultrasphere-0DS(250mm×4.6 mm，5μm)，流动相为甲醇-乙腈-水(50：25：25)，检测波长为243nm，柱温为常温。
1．3 标准溶液的配制精密称取5.28mg丙戊酸钠对照品于l0ml容量瓶中。加水溶解并稀释至刻度，得标准溶液0.528 mg／ml。
1．4 相关溶液的配制 内标液：取1ml正庚酸至100ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，得1％正庚酸内标液。衍生化试剂：精密称取1.0 g a-溴苯乙酮至100ml容量瓶中，用乙腈稀释至刻度。
1．5 样品处理取血清0.1ml，加内标液10μl，异丙醇50μl，1mol／L硫酸0.1ml混匀，加正己烷2ml，涡旋提取3min，2500r／min离心，10min后取上清液1ml，加a-溴苯乙酮液10μl，三乙胺10μl，混匀，于50℃水浴反应10min后，在65℃水浴中用氮气吹干，残渣加甲醇200μl溶解进样20μl，以内标法峰面积定量。
2 结果
2．1 色谱行为按样品处理方法分别提取空白血清，空白血清加对照品，测得色谱图。
2．2 线性关系 取对照品液适量加入0.1ml血清，使对照品浓度为1.76，17.6，35.2，70.4，88.0，140.8，176.0μg／ml，各加内标液10μl，按样品处理方法操作。得浓度C与峰面积A回归方程：C=63.90620A一1.31331，r=0.9999，(n=3)。其中A为A样品／A内标，线性范围1.76-176.0μg／ml。
2．3 回收率实验配制对照品液为高、中、低3种浓度的血清样品各5份，参照样品处理方法操作，计算回收率。
2．4 精密度实验配制对照品液高、中、低3种浓度的血清样品各5份，分别于同一天及5d内每天测定。
3 讨论
有文献报道，采用正戊烷提取血样，本实验先采用正戊烷提取，由于衍生化反应温度为50℃，而正戊烷沸点为36.1℃ ，未衍生化完全溶剂已蒸干，故采用正己烷(沸点69℃)提取。
参考文献：
[1]陈新谦，金有豫，汤光．新编药物学[M]．第15版．北京：人民卫生出版社。2003．
[2]郝润喜，闰彩萍。刘玉玺．高效液相色谱．柱前衍生法测定丙戊酸镁血药浓度[J]．药物分析杂志。1997，17(3)：172．
作者：
2007-5-18