反相高效液相色谱法同时测定扑麻滴鼻剂中3组分的含量

摘要:目的：建立以反相高效液相色谱法同时测定扑森滴舁刺中马丧馥氯笨那敏、呋喃西林和盐酸麻黄碱含量的方法.方法：色谱柱为XDBC8：流动相由甲醇(A)、乙睛(B)和0.02mol／L磷酸二氢钾溶液(含0.2％乙三胺，磷酸调pH至3.0，C)组成，进行线性梯度洗脱(0min～3.5min，A：B：C=6：13：81；8.5min．以后，A：B：C=6：30：64)：流速为1.0ml／min；柱温为3O℃；检测波长为254nm；内标为氯霉素 结果：马来酸氯苯那敏、呋喃西林、盐酸嘛黄减检测浓度分别在0.04～0.20、0.02～0.10、0.50～2.50mg／ml范围内线性关系良好：平均回收率分别为99.44％(RSD)=0.48％，n=3)、101.36％(RSD=0.41％．n=3)、99.43％(RSD=0.59t％，n=3) 结论：本方法可靠、简便、准确，可用于扑麻滴鼻刹的质量控制
关键词：反相高效液相色谱法；扑麻滴鼻剂：马来酸氯苯那敏：呋喃西牧：盐酸庥黄碱
扑麻滴鼻剂系暨南大学附属第二医院研制的医院制剂，主要南马来酸氯苯那敏((Thlorphenamine malcate，Ch1)、呋喃西林(Furacilin，Fur)、盐酸麻黄碱(Ephedrine hydrochloride．Eph)、羟苯乙酯等组成：现已有紫外分光光度法测定扑麻滴鼻剂中Chl、Fur含量及高效液相色谱法同时测定复厅呋喃西林滴鼻液Fur和Eph含量的文献报道、但至今尚未有同时测定3组分含量方法的报道，因此，笔者采用反高相离效液相色谱法同时分离扑麻滴鼻剂中的3组分并测定其含量，方法可靠、简便，可用于扑麻滴鼻剂的质量控制。
1 仪器与试药
1．1 仪器
HP-1100高效液相色谱仪，包括二极管阵列检测器、LG-3D色谱工作站(美国Agilent 公司)； Foledo AG285电子天平(瑞士Mettler公司)：
1．2 试药
Chl、氯霉素对照品(中国药品生物制品检定所)；Fur、Eph原料(暨南大学附属第二二医院制剂室)； 复方呋喃西林滴鼻剂(暨大学附属第 医院制剂宅)；甲醇、乙睛为色谱纯：磷酸二氢钾、磷酸、 乙胺为分析纯：水为重蒸馏水。
2 方法与结果
2．1 色谱条件
色谱柱： Zorbax Eclipse XDB C8(150mm ×4.6mm，5μm)；流动相：由甲醇(A)、乙睛(B)和0.02mol／L磷酸二氧钾液(含0.2％乙三胺，磷酸凋pH至3.0．C)组成，进行线性梯度洗脱；流速：1.0ml／min；柱温：3O℃；检测波长：254nm；进样：2μl：内标物：氯霉素。
在该色谱条件下，各组分保留时间分别为Eph2.50min，Fur 5.28min、氯苯那敏9.69min、氯霉素10.70min。
2．2 内标溶液的制备
称取氯霉素对照品适量，加初始比例的流动相溶解并稀释成1.0mg／ml的溶液，即为内标溶液。
2．3 对照品贮备液的制备
准确称取Chl对照品40mg、Fur对照品20mg、Eph对照品500mg，同时置于100ml容量瓶中，用初始比例的流动相溶解并稀释至刻度，混匀，即得含有0.4mg／ml Chl、0.2mg／ml Fur和5.0mg／ml Eph的对照品贮备液。
2．4 标准曲线的绘制
精密吸取对照品贮备液1、2、3、4、5ml，分别置于10ml容量瓶中，并各加入“2．2”项下溶液0.5ml，用初始比例的流动相稀释至刻度，混匀。按“2．1”项下色谱条件进样分析，记录峰面积。分别以各组分峰面积与内标峰面积比(Y)对相应的组分浓度(C)进行线性回归分析。
2．5 干扰性试验
按处方量配制成不含3组分的溶液，并按“2．8”项下方法稀释测定。结果表明，处方中的各辅料不干扰3组分的测定。
2．6 精密度试验
按“2．3”、“2．4”项下方法精密配制成高、中、低3种不同浓度系列的样品，并于同日内重复测定5次，得日内精密度，相对标准差分别为0.66％(Ch1)、1.04％(Fur)、0.93％(Eph)；5天内重复测定5次，得日间精密度，相对标准差分别为0.88％(Ch1)、1.65％(Fur)、1.32％(Eph)。
2．7 回收率试验
按照处方组成分别准确称取Chl、Fur、Eph适量，并加入处方量的各辅料，配制成模拟制剂，作为供试品溶液。吸取2、3、4ml供试品溶液，分别置于10ml容量瓶中，精密加入“2．2”项下溶液0.5ml，用初始比例流动相定容(各浓度重复3份)，按“2．1”项下色谱条件进样分析，并计算回收率。
2．8 样品含量测定
精密吸取样品溶液3ml，置于100ml容量瓶中，精密加入“2．2”项下溶液0．5ml，用初始比例的流动相定容，按“2．1”项下色谱条件进行分析测定。
3 讨论
笔者曾试用C18柱，选择适当的流动相并调整有机相和水相的比例进行分离测定考察，结果马来酸、Eph和Fur及其杂质得到较好的分离，但氯苯那敏及Eph拖尾严重，即使加扫尾剂三乙胺也不能改善拖尾现象。而换用C。柱后，Eph的拖尾现象得到了较好的改善，并且峰形对称、稳定。
Chl在HPLC色谱柱上，马来酸与氯苯那敏分离，出现两个色谱峰，而氯苯那敏为主药，故笔者仅对氯苯那敏进行含量测定。
由于氯苯那敏的极性低，在流动相中当磷酸二氢钾溶液所占比例较高时保留时间延长、峰形加宽，而磷酸二氢钾溶液的比例减小时，氯苯那敏的保留时间缩短，但Eph和Fur不能很好分离，故笔者采用梯度洗脱。经多次试验考察证实，在0min～3．5min内保持流动相A：B：C一6：13：81的比例不变，使Eph和Fur及其杂质峰很好地分离；3.5min～8.5min内流动相的比例缓慢地改变至A：B：C一6：30：64，氯苯那敏和氯霉素能得到完全分离，保留时间适中，并且不受基线飘移的影响。
试验发现，流动相的pH值在2.8～3.5之间均能保证各峰的峰形和分离效果。由于Fur对光和热的稳定性较差，在水中的溶解度小，故在制备对照品溶液时，先用甲醇使其溶解，再用流动相定容，并且将制备好的对照品溶液避光和置于冰箱中保存，这样可以减少因Fur的降解对测定结果的影响。
参考文献
【1】 张自然，唐承舜，廖波，等．CPA矩阵紫外分光光度法测定扑麻滴鼻液中扑尔敏和麻黄素的含量【J】．华西药学杂志，1999，14(1)：55．
【2】 邢翔飞，金桂兰．反相高效液相色谱法测定复方呋喃西林滴鼻剂的含量【J】．中国药房，2002，13(7)：430．
【3】 李小燕，陈合山．HPLC法同时测定呋麻滴鼻液中二组分的含量【J】．药物分析杂志，1996，16(1)：37