咳喘灵口服液是我院自拟处方配制的
中药制剂，由中医古方《止嗽散》增减而来；采用水提醇沉工艺制得，
临床已使用多年，止咳、平喘、化痰具有确切的疗效。处方由麻黄(每支10ml相当于3g)、罂粟壳、浙贝母、紫苑、白前、甘草等组成。长期以来，本制剂质量控制一直停留于检查pH值、相对密度、对主要成分进行薄层色谱定性分析等较低层次上。《中国药典)2000版对几种含麻黄中成药中除两种采用高效液相色谱法和薄层扫描法对麻黄碱进行定量外，其余品种的质控标准亦多较低。我们利用麻黄碱的有关性质与其它成份分离后，用HPLC法测定其含量，为本方定量质控提供一种可行的方法，同时可为其它含麻黄碱成份的中药制剂的定量质控提供借鉴。
1 仪器与试药
日本Shimadzu LC-10ATvp高效液相色谱仪，配7725 i六通阀，20μl定量环，Shimadzu CLASS-vp V6．12 SP3版软件。
盐酸麻黄碱对照品(中国药品生物制品检定所)；咳喘灵口服液(本院制剂室)；甲醇、三乙胺为色谱纯；磷酸、磷酸二氢钾、盐酸、氢氧化钠为分析纯。
2 方法与结果
2．1 色谱条件
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，
Shimadzu Cl8柱(4.6mm×150 mm，5μm)；流动相：甲醇-0.05mol/L 磷酸二氢钾-三乙胺(50：50：0.2)，磷酸调pH 3.7；流量：1.0ml/min；柱温：室温；检测波长254nm；进样体积：20μl；TR：2.13 min。此条件下盐酸麻黄碱色谱峰理论塔板数为1850。
2．2 检测波长的选择
取4O0μg/ml 的盐酸麻黄碱对照品溶液，在200～300nm波长范围内进行光谱分析，结果在246、251、254、262 nm处，分别有最大吸收峰。其中254nm波长处吸收更灵敏，吸收值更大。故选取254nm为检测波长。
2．3 溶液的制备
2．3．1 对照品溶液的制备 精密称取盐酸麻黄碱对照品0.1g，用水少量溶解，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，制成10mg/ml的溶液。精密量取此液0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60m1分别置10ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，制成含盐酸麻黄碱300、350、4OO、450、500、550、600μg/ml的系列溶液，得对照品溶液。
2．3．2 供试品溶液制备 精密量取按审定标准
检验合格的咳喘灵口服液样品40ml，置250ml蒸馏烧瓶中，加10 mol/L氢氧化钠溶液100ml，加氯化钠7.5 g，超声处理10 min，蒸馏，再用预先盛有2mol/L盐酸溶液5ml的100ml量瓶，收集蒸馏液近90ml，用10mol/L氢氧化钠溶液调节pH3.5，加水至刻度，即得供试品溶液。
2．4 盐酸麻黄碱线性关系试验
在上述色谱条件下，将各浓度对照品溶液精密量取20μl进样。以峰面积(A)与对照品浓度(C：μg/ml)进行回归(n=7)，得回归方程。A=343.64C+3895.84，r=0.9925。验证麻黄素在300～600μg/ml范围内相关性良好。
2．5 进样精密度试验
在上述色谱条件下，精密量取上述4OOμg/ml对照品溶液20μl，连续进样5次。测得峰面积为144295、143310、140725、140510、141550，结果盐酸麻黄碱平均峰面积为142078，RSD值为1.17％。
2．6 空白试验
按咳喘灵口服液处方称取除麻黄外的各药(包括处方中的蔗糖、尼泊金乙酯，药量以10ml×50支计)，按审定的水提醇沉工艺制成空白浓缩液400ml。精密量取浓缩液80ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度。精密量取40ml，依“供试品溶液制备”项下的方法，自“置250ml蒸馏烧瓶中”依法操作，即得空白试验液。精密量取2Oμl，进样，在盐酸麻黄碱相应的保留时间无吸收峰。
2．7 加样回收率试验
照“空白试验”项下，制备空白浓缩液400ml。精密量取浓缩液8Oml，10mg/ml盐酸麻黄碱对照品溶液7.5、1O、12.5、15ml，分别置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，制成0.75、1.0、1.25、1.50mg/ml共4个由低到高浓度的测定液。精密量取上述测定液40ml，依“供试品溶液制备”项下的方法，自“置250ml蒸馏烧瓶中”依法操作，即得供试溶液。精密量取供试溶液20ml，进样，测定峰面积。
2．8 干扰试验
精密量取上述空白浓缩液8Oml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度。精密量取4Oml，依“供试品溶液制备”项下的方法，自“置250ml蒸馏烧瓶中”依法操作，精密吸取所得溶液20μl，进样，在TR=2.13min处未出现明显峰，在TR=3.23min处有小峰，但不影响样品的含量测定。
2．9 重复性试验
取同批样品(040210)分别制备3份样品试液，按样品含量测定方法测定，结果盐酸麻黄碱的RSD值为1.86％。
2．10 样品含量测定
精密量取按审定标准检验合格的咳喘灵口服液样品40ml，依“供试品溶液制备”项下，自“置250ml蒸馏烧瓶中”依法操作，即得样品液。精密吸取样品液2Oμl，进样，每批次重复2次，以3次峰面积取平均值，由标准曲线计算样品含量。测得值。
2．11 供试液稳定性试验
在上述色谱条件下，用样品含量测定方法测定批号为040210样品O、24h样品中盐酸麻黄碱的含量。结果O、24h的测得值基本不变，稳定性良好。
3 讨论
由于方中主药麻黄的药用植物来源的不同，其有效成份麻黄碱等生物碱随着采收季节、贮存时间、炮制方法等的不同，其含量也有差异，导致同样的投料量和配制工艺，其制剂成品中的有效成份含量难以保证一致，且差异较大。另外本方中多种药材含有生物碱，一般的分析方法如酸碱滴定法等，仅能测定其总碱量，难以用于单一成份的定量测定。我们利用麻黄碱在碱性条件下可随水蒸汽蒸发的特性，将麻黄碱与本方中的其它药物所含有的生物碱相分离后，再用高效液相色谱仪进行定量检测。流动相中加入三乙胺作为扫尾剂，有利于改善峰形，减少拖尾。用磷酸调节pH 3.7是使峰时提前，峰形较好。防腐剂尼泊金乙酯及其它生物碱对测定无干扰。
参考文献
1 国家药典委员会编．中华人民共和国药典[s]．一部，北京：化学工业出版社，20O0：517～518，589．
作者：
2007-5-18