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槐花含量测定方法(芦丁)

来源:药物分析网
摘要:槐花为豆科植物槐SophorajaponicaL。2005版《中国药典》一部采用紫外-可见分光光度法测定总黄酮的含量,采用高效液相色谱法测定芦丁的含量。一、高效液相色谱法2005版《中国药典》槐花含量测定项下:色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。理论板数按芦丁峰计算应不得低于2000。...

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    槐花为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花及花蕾。2005版《中国药典》一部采用紫外-可见分光光度法测定总黄酮的含量,采用高效液相色谱法测定芦丁的含量。
    一、高效液相色谱法
    2005版《中国药典》槐花含量测定项下:
    色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-1%冰醋酸溶液(32:68)为流动相;检测波长为257nm。柱温40℃。理论板数按芦丁峰计算应不得低于2000。
    供试品溶液的制备:取本品粗粉(槐花约0.2g,槐迷约0.1g),精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加甲醇50ml,称定重量,超声处理(功率250W,频率25kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,滤过。精密量取续滤液2ml,置10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
    HPLC法测定槐花药材及其制剂中芦丁的含量时,常用的流动相系统为甲醇-冰醋酸溶液,比例一般为:
    ①Gilson GADE 型高效液相色谱仪;色谱柱为Hypersil-C18 柱(250mm×4.6mm ,内径5μm);流动相为甲醇-水-冰醋酸(40:57.5:2.5);检测波长254nm。
    ②美国WATERS 600E 系统;μBondapak C18 10μm 柱(3.90mm×300mm) ;柱温为室温;流动相为甲醇-水-冰乙酸(40:57.5:2.5);检测波长为254nm。供试品溶液的制备:取槐花药材中粉0.1g,精密称定,置50ml量瓶中,加甲醇40ml,超声处理40min,放置至室温后加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液10ml置水浴上蒸干,残渣加水3~5ml使溶解, 放冷,通过聚酰胺层析柱(65~80目,5g,内径1cm,湿法装柱),以水50ml洗脱,弃去水液,再用20%乙醇50ml洗脱,洗脱液弃去,继用50%乙醇100ml洗脱,收集洗脱液并定容。(杨美华等,“高效液相色谱法测定槐花药材中芦丁的含量”,中国药事,2000,14(1))
    ③Waters高效液相色谱仪;色谱柱为luna 5μ C18柱;流动相为甲醇-水-冰乙酸(45:53:2);检测波长为355nm;柱温为30℃。
    ④岛津LC-10A 高效液相色谱仪;色谱柱CLC-BDS-C18(6.0mm×150mm,5μm);流动相:甲醇-3%醋酸溶液(35:65);检测波长359nm;柱温室温。

    二、分光光度法
    刘青林等用分光光度测定痔浴宁颗粒剂中芦丁含量, 分光光度计为岛津UV-1601型。5 %亚硝酸钠-10%硝酸铝-NaOH试液为显色剂,500nm波长处测定吸收度,样品用乙醚脱脂后甲醇回流提取。

    三、毛细管电泳
    陈勇川等采用高效毛细管电泳法测定槐花和槐角中芦丁的含量。Bio Focus 3000 型毛细管电泳仪(美国Bio-Rad公司);融熔石英毛细管柱(未涂渍) (50μm×50cm)(有效分离长度45.5 cm)。运行缓冲液采用50mmol/L硼酸缓冲液和50mmol/LSDS,用磷酸调pH8.0;操作电压20 kV ,极性由正到负,检测波长260nm,柱温25℃;采用压力进样,常数为10psi×s。

作者: 2007-5-18
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