点击显示 收起
|
摘 要：以薄层色谱、高效液相色谱、三维高效液相色谱对滨蒿中利胆保肝活性成分进行了分离分析，采用液相色谱-质谱联用仪、电喷雾离子阱质谱对其结构进行鉴定．结果表明：滨蒿中的利胆有效成分除含有绿原酸、对羟基苯乙酮、
6,7-二甲氧基香豆素外，还首次分离鉴定出具有保肝活性的茵陈色原酮. The Determination of Capillarisin in Artemisia Scoparia by LC／MS Sun Xiuyan Xing
Shanmin Li
Minghui Wang Liqun Yuan Jian Abstract：Analyses and isolation for the choleretic constituents in Artemisia
scoparia by TLC , HPLC and 3D-HPLC, and the identification of choleretic
constituents were performed by HPLC-ESI/MS. The results showed that
besides chlorogenic acid, p-hydroxyacetophenone and 6,7-dimethylesculetin
as the choleretic constituents in Artemisia scoparia, it was for the first
time that a higher choleretic constituent-capillarisin was isolated and
identified. 茵陈自古以来是中医治疗各种肝胆疾病的要药〔1～3〕．近几年，现代药理研究又进一步阐明茵陈其保肝、利胆和护胰机理，此外尚发现其调血脂、降血压、抗肿瘤和抗病毒性反应等新的药理作用〔4～5〕,使得茵陈活性成分的追踪越来越引起人们的重视．《中国药典》1995版规定茵陈的植物基源有两种：滨蒿Artemisia scoparia Waldst. et Kitag.或茵陈蒿Artemisia capillaris Thunb.，并有大量文献报道其主要有效成分为绿原酸（chlorogenic acid）、6,7-二甲氧基香豆素(6,7-dimethylesculetin，DE)、对羟基苯乙酮(p-hydroxyacetophenone)〔6～8〕．1976年，日本学者小宫威弥等人从茵陈蒿中分离出保肝活性比6,7-二甲氧基香豆素更强的物质茵陈色原酮(capillarisin，CAP)〔9〕，滨蒿中是否含有，至今未见报道．作者对沈阳郊区野生滨蒿，分别采用薄层色谱(TLC)、高效液相色谱(HPLC)、三维高效液相色谱对滨蒿中利胆保肝活性成分进行了分离分析，用离子阱质谱(ESI/MS)对待测物准分子离子峰及其碎片离子峰进行多级全扫描质谱测定．首次从滨蒿中分离鉴定出具有保肝活性的茵陈色原酮． 1 仪器与试药 日本岛津LC-10AD高效液相色谱仪；SPD-M10A二极管阵列检测器；CLASS-10A色谱工作站；美国Finnigan公司LCQ型液相色谱-质谱联用仪，ESI（电喷雾电离）源及LCQ数据处理系统.甲醇（色谱纯）；乙腈（色谱纯）.标准品：6,7-二甲氧基香豆素和茵陈色原酮由中国中医研究院提供．对照品：对羟基苯乙酮由本校有机教研室提供．药材：采自沈阳郊区，经本校中药鉴定室许春泉老师鉴定为滨蒿Artemisia scoparia Waldst. et Kitag. 2 方法与结果 2.1 样品制备 精密称取干燥、恒重样品5 g，分别用10倍、8倍、6倍量的水煎煮2、1.5、1 h．合并煎液，减压浓缩至20 mL，转移至125 mL分液漏斗中，用氯仿萃取3次(每次20 mL)，合并氯仿液，减压回收氯仿，残渣用甲醇溶解，定量转移至10 mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，混匀，作为待测液． 2.2 TLC法 滨蒿待测液中CAP的TLC分析条件见表1. Tab.1 Analytical conditions of capillarisin in Artemisia scoparia by TLC |
| Solid phase | Developing agent | Standard | Color-developing agent | Rf value |
| Silica G | benzene-methanol-water(35∶5∶5) | CAP | FeCl3 | 0.63 |
| Silica G | toluene-ethylformate-formic acid (7∶3∶1) | CAP | FeCl3 | 0.50 |
| Polyamide film | water-ethanol-acetylacetone(4∶2∶1) | CAP | FeCl3 | 0.23 |
|
实验结果表明，样品在与对照品相应的位置上显相同的灰色斑点． 2.3 HPLC法 HPLC分析条件：色谱柱：Kromasil
C18不锈钢柱（200 mm×4.6 mm I.D，粒径：5
μm）；流动相：乙腈-水(V∶V=20∶80～90∶10）；梯度洗脱〔10〕，洗脱时间：80 min；流速：1
mL／min；柱温：40℃． Fig.1 HPLC chromatogram of
the standards and its retention time
(min) Fig.2 HPLC chromatogram of
the standards and its retention time
(min) Fig.3 3D-HPLC chromatogram of the standards and its retention time (min) A—p-Hydroxyacetophenone;B—6,7-Dimethylesculetin;C—Capillarisin 2.4 HPLC-MSn法 HPLC-MSn分析条件：色谱柱：Kromasil C18不锈钢柱（200
mm×4.6 mm I.D，粒径：5 μm）；流动相：甲醇；流速：0.5
mL／min；柱温：20℃；进样量：20 μL；质谱参数设置：离子源喷射电压4.25 kV；毛细管温度：180℃；毛细管电压30
V；鞘气（N2）流速0.75 L／min；辅助气流速0.15
L／min． Fig.4 TIC chromatogram of capillarisin A—Standard;B—Sample Fig.5 Full scan MS2 spectra of capillarisin A—Standard;B—Sample Fig.6 Full scan MS3 spectra of capillarisin A—Standard;B—Sample Fig.7 The main proposed fragmentation process for capillarisin 3 讨论 a．HPLC测定中发现保留时间为22.82
min的色谱峰和CAP的色谱峰部分重叠．经ESI/MS检测，其准分子离子峰m/z也为317.4，但选择离子MS2、MS3子离子质谱图与CAP的明显不同．其结构鉴定有待于进一步研究． 致谢 HPLC-MS质谱图由本室李雪庆、陈笑艳测试，对羟基苯乙酮由有机教研室胡春老师提供，本文承许春泉、高光恩教授给予指导帮助，特此致谢．■ 作者单位：孙秀燕（沈阳药科大学分析测试中心,沈阳 110015） 参考文献： ［1］李时珍．本草纲目：草部第十五卷．北京：人民卫生出版社，1982．941～943 收稿日期：1999-06-07 |