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HPLC法测定复方保健药液Ⅰ号中醋酸洗必泰的含量

来源:中国色谱网
摘要:(中山医科大学科技开发部广州510080)摘要:采用高效液相法测定复方溶液中醋酸洗必泰的含量,以HYPERSILBDS为固定相,甲醇-水相(取磷酸二氢钾4g,三乙胺2.5ml,十二烷基苯磺酸钠1g,加水至1000mL,并用磷酸调节pH至2.5)(80∶20)为流动相,紫外检测波长为260......

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(中山医科大学科技开发部 广州 510080

摘要:采用高效液相法测定复方溶液中醋酸洗必泰的含量,以HYPERSIL BDS为固定相,甲醇-水相(取磷酸二氢钾4 g,三乙胺2.5 ml,十二烷基苯磺酸钠1 g,加水至1000 mL,并用磷酸调节pH至2.5)(80∶20)为流动相,紫外检测波长为260 nm,平均回收率为96.25%,RSD为0.62%。方法简单,准确。

Determination of Chlorhexidine Acetate in Compound Solution by HPLC

WANG Bin,WU Xin1,LI Guan-hong(Technology Development Department of Sun Yat-sen University of Medical Sciences,Guangzhou,510080;1Biochemistry Department of Sun Yat-sen University of medical Sciences,GuangZhou,510080)

ABSTRACT:A HPLC method is described for the determination of chlorhexidine acetate in compound solution on a BDS column using methol-buffer solution (80∶20)as mobile phase.The buffer solution contains 4g potassium dihydrogen phosphate,2.5mL triethylamine,1g sodium dodecylbenzensulfonate in 1000 mL water solution and adjust to pH2.5 with phosphoric acid.The UV detection wavelength was 260nm.It discussed that The influence of column packing,pH,triethylamine,sodium dodecylbenzensulfonate on chromatographic behavior of chlorhexidine acetate.The method is simple,sensitive and suitable for the determination of the compound solution.
KEY WORDS:
HPLC;Chlorhexidine acetate;Determination

   
复方保健药液I号(含有醋酸洗必泰)是我校科技开发部和福建某公司联合研制开发的中西药复方制剂,具有强大的抑杀菌作用并兼有消炎、止痛、止痒、防霉作用。由于本药液中含有多种中西药成分,难以用非水滴定法(中国药典1995版)或紫外分光光度法测定醋酸洗必泰的含量。本文在对多种色谱体系进行筛选的基础上,建立了以辛烷基硅烷键合的硅胶为固定相的反相高效液相色谱法,分离和测定复方保健药液I号中醛酸洗必泰,并用于制剂的质量控制。
1 仪器与试药
   
美国Waters 510高效液相色谱仪,Waters 486紫外检测器,Waters 810色谱工作站;复方保健药液I号样品为福建某公司提供,醋酸洗必泰对照品为符合中国药典规格的原料;其它试剂均为分析纯。
2 色谱条件
   
色谱柱:HYPERSIL BDS柱(300 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:甲醇-水相(取磷酸二氢钾4 g),三乙胺2.5 ml,十二烷基苯磺酸钠1 g,加水至1000 ml,并用磷酸调节pH至2.5)(80∶20);检测波长:260 nm;流速:1.0 ml.min-1;柱温:室温。该条件下的样品液的色谱图(见图1)。


图1 样品液的高效液相色谱图(醋酸洗必泰tR=6.14 min)

3 线性范围及方程
    对照品溶液的配制:精密称取醋酸洗必泰对照品约10 mg,置100 ml量瓶中,用无水乙醇溶解定容,摇匀。
    精密量取醋酸洗必泰对照品溶液0.25,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0ml,分别置10 ml量瓶中,用无水乙醇溶解定容,摇匀;分别取15 μl进样,按外标法以峰面积(A)对浓度(C)回归,得线性方程和相关系数:C=2.231×10-5A+2.122(r=0.9993),表明醋酸洗必泰在2.5 μg~40 μg.ml-1浓度范围内呈良好线性关系。
4 回收率及精密度试验
    按处方比例配制含醋酸洗必泰为标示量90.0%~110.0%的模拟样品6份,依样品处理方法测定。6次测定的回收率及精密度试验结果(见表1)。

表1 回收率及精密度试验结果

试验
编号
加入量
(μg.ml-1
测定量
(μg.ml-1
回收率
(%)
平均回收率
(%)
精密度
(RSD,%)
1

20.56

19.63

95.48

2 19.55 18.78 96.06
3 20.20 19.64 97.23 96.25 0.64
4 21.09 20.18 95.69
5 19.89 19.18 96.43
6 20.33 19.64 96.61

5 样品含量测定
    精密量取本品5 ml,置100 ml量瓶中,用无水乙醇溶解定容、混匀。取15 μl进样,按外标法以峰面积计算。3批样品经3次测定的平均结果(见表2)。

表2 样品含量测定结果(标示量%,n=3)

批号 醋酸洗必泰 RSD(%)
990823

100.84

0.65

990715 99.02 0.70
990426 98.23 0.82

6 讨论
6.1 色谱柱不同填料对样品色谱行为的影响 实验过程中,曾尝试在ODS柱上考察醋酸洗必泰的色谱行为。由于硅胶表面键合相覆盖程度不同,在不同牌号的ODS柱上醋酸洗必泰的色谱峰形有很大差异,产生诸如峰形平缓,拖尾严重,保留时间过长甚至长期地保留在色谱柱上等问题。这是由于醋酸洗必泰分子结构中含有多个仲氨基和亚氨基,与硅胶表面的硅醇基(一般ODS柱的硅胶表面的硅醇基尚有50%或以上仍呈游离状态)之间有较强的离子交换和形成氢键的相互作用的关系。而在采用BDS柱后,选择同样的流动相,醛酸洗必泰的色谱峰形较ODS柱有很大改善。经反复筛选,确立了HYPERSIL BDS柱上以甲醇-三乙胺-十二烷基苯磺酸钠-磷酸盐缓冲液为流动相的色谱体系。醋酸洗必泰的色谱峰形较对称、尖锐,显示出该色谱体系具有较好的适用性。
6.2 流动相的pH值对样品色谱行为的影响 在上述流动相系统中,考察了不同流动相对样品色谱行为的影响,试验表明:pH值越低,醋酸洗必泰的峰形越好。考虑到色谱柱对pH值的耐受性,选择了pH值为2.5的流动相系统。
6.3 流动相的选择 流动相中加入三乙胺,可以抑制或掩蔽固定相表面的游离硅醇基的活性,使醋酸洗必泰易于出峰,且保持良好峰形,去除色谱峰的拖尾现象。加入十二烷基苯磺酸根作为竞争离子,因为碱性药物(醋酸洗必泰)在固定相上的保留过程可以认为是质子化碱性物质(阳离子)和流动相中这些竞争离子(阳离子)共同竞争硅胶的离子交换部位。因此,流动相中竞争离子的种类和浓度,对于碱性药物的保留和分离,起着重要的调节作用。
参考文献
[1]张秉彦等:醋酸洗必泰栓含量的紫外分光光度法测定法,药物分析杂志,1984,4(3):180-1.
[2]李开兰等:复方醋酸洗必泰溶液测定方法的研究,华西药学杂志,1997,12(1):40-2.
[3]冀学芳等:RP-HPLC法同时测定复方特比萘芬软膏中盐酸特比萘芳、醋酸洗必泰和醋酸去炎舒松的方法研究,药物分析杂志,1997,17(6):363-5.

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1 中山医科大学生物化学教研室

作者: 2007-5-18
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